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产品名称：CY5.5-NTA-Ni，荧光标记糖类

制备与优化

（1）CY5.5-NTA-Ni制备流程

材料准备：

NTA溶解于MES缓冲液（pH 6.0，50 mM）。

CY5.5-胺溶解于DMSO（浓度≤1 mM，避光）。

Ni²⁺螯合：

加入NiCl₂（NTA:Ni²⁺摩尔比=1:1），室温反应30 min。

荧光标记：

加入EDC（2 mM）和NHS（5 mM），活化羧基30 min。

加入CY5.5-胺（NTA:CY5.5摩尔比=1:3），避光反应4 h。

纯化与表征：

透析：使用3.5 kDa MWCO透析袋去除未反应染料（含5 mM EDTA的PBS，4℃）。

标记效率：通过荧光分光光度法测定（λex=675 nm，λem=695 nm）。

螯合能力验证：通过His-tag蛋白结合实验（如GFP-His₆）评估功能保留。

（2）关键优化参数

pH控制：羧基活化推荐pH 6.0（平衡活化效率与Ni²⁺稳定性）。

离子强度：添加NaCl（0.15 M）屏蔽静电排斥，提升标记效率。

Ni²⁺保护：标记前加入过量Ni²⁺（10倍摩尔比），避免螯合位点被染料占据。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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