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产品名称:Cy5-Vimentin, 花菁素Cy5标记波形蛋白
一、合成方法
1. 合成路线
步骤:
波形蛋白的预处理:
通过重组表达或细胞裂解液提取波形蛋白,确保其天然构象。
Cy5染料的活化:
将Cy5-NH₂与琥珀酰亚胺酯(NHS ester)反应,生成活性酯。
标记反应:
活性酯化的Cy5与波形蛋白的氨基反应,形成酰胺键。
关键点:
反应需在低温(4℃)和中性pH(pH 7.4)下进行,避免波形蛋白变性。
使用过量Cy5染料(摩尔比10:1)提高标记效率。
2. 纯化与表征
纯化:
通过凝胶过滤(如Sephadex G-25)去除未反应的Cy5和副产物。
表征:
SDS-PAGE:检测波形蛋白的分子量是否符合预期。
荧光光谱:验证Cy5的激发和发射波长是否符合标准。
质谱(MS):确认Cy5与波形蛋白的连接。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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