产品名称：FITC-PEG-COOH，荧光素PEG羧基

实验操作指南

1. 生物分子偶联

EDC/NHS法：

将FITC-PEG-COOH（1 eq）溶于MES缓冲液（pH 5.5），加入EDC（4 eq）和NHS（10 eq），室温活化30分钟。

加入含氨基的目标分子（如抗体，1.2 eq），4℃反应12小时，透析纯化。

标记效率检测：荧光分光光度计测定FITC浓度（ε=68,000 M⁻¹cm⁻¹），计算偶联比（FITC/蛋白）。

2. 纳米材料修饰

金纳米颗粒（AuNPs）：

制备13 nm AuNPs，加入FITC-PEG-COOH（50 eq相对于Au），室温搅拌24小时。

离心洗涤，Zeta电位从-30 mV变为-20 mV（因FITC带负电），荧光强度与PEG长度正相关（2 kDa PEG荧光强度是5 kDa的1.5倍）。

3. 细胞成像实验

步骤：

将FITC-PEG-COOH标记的抗体与细胞共孵育30分钟，PBS洗涤后荧光显微镜观察，绿色荧光信号强度与抗体浓度呈线性关系（R²=0.99）。

优势与局限性

优势：

双功能设计：PEG提高水溶性和生物相容性，FITC提供高灵敏荧光信号。

反应活性高：羧基可直接偶联含氨基分子，无需额外活化步骤。

应用广泛：适用于蛋白质、核酸、纳米材料等多种底物标记。

局限性：

光漂白性：FITC在持续光照下易淬灭，需优化成像条件（如降低激光功率）。

pH敏感性：荧光强度在pH<5时显著下降，不适用于酸性环境（如溶酶体）。

背景干扰：血清中FITC自发荧光可能导致假阳性，需优化洗涤步骤。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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