产品名称：CD19 car mRNA (Mouse)-LNP脂质纳米粒的分子结构与特性
分子结构与特性
1.1 CD19 CAR mRNA设计
序列结构：
抗原结合域：抗CD19单链抗体（scFv，如FMC63克隆），特异性识别B细胞表面CD19抗原。
跨膜区：CD8铰链区，提供结构稳定性。
共刺激域：4-1BB（CD137），增强T细胞活化与持久性。
信号域：CD3ζ，触发T细胞激活信号。
优化策略：采用N1-甲基假尿苷（N1mψ）修饰mRNA，降低免疫原性并提高稳定性；通过密码子优化（如GC含量调整）提升翻译效率。
示例序列：
CD19 ScFv-CD8-4-1BB-CD3ζ（专利SEQ ID NO.1），已验证可高效表达并杀伤B细胞肿瘤。
1.2 LNP递送系统
成分：
可电离脂质（如MC3、SM-102）：pH敏感，生理pH下中性，酸性环境（内体）中质子化，促进内体逃逸。
辅助脂质：
磷脂（如DSPC）：稳定LNP结构。
胆固醇：调节膜流动性与刚性。
PEG-脂质（如PEG2000-DMG）：延长循环时间，减少聚集。
比例：典型配方中可电离脂质占50%，胆固醇30-40%，磷脂10%，PEG-脂质1-2%。
制备工艺：
微流控混合：脂质-乙醇溶液与mRNA-柠檬酸缓冲液按流速比1:3混合，形成粒径约100 nm的LNP。
后处理：透析或超滤去除乙醇，加入蔗糖作为冻干保护剂，-80℃保存。
包封率测定：
RiboGreen荧光法：通过破乳前后RNA量的差异计算包封率，通常需≥90%。
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