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Alexa Fluor 647 羧酸是一种含有羧基(-COOH)功能团的荧光染料,分子结构中包含有染料核心与羧酸基团。羧酸基团使得AF647可以通过化学方法活化,转化为活性酯(如NHS酯)后与蛋白质、核酸、多肽等生物分子中的氨基形成共价键,实现高效偶联。AF647羧酸本身水溶性良好,化学稳定性优异,能够在多种缓冲液中保持性能稳定。
AF647的羧酸形式一般用作偶联前的原料,研究者可根据实验需求通过活化和偶联反应制备专门的标记物。
产品名称:AF647 羧酸
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
供应:西安瑞禧生物科技有限公司
主要应用领域
免疫荧光标记
Alexa Fluor 647羧酸通过转化为NHS酯后,广泛用于抗体偶联,标记靶向蛋白质,实现细胞、组织中特异性蛋白的高灵敏成像。尤其适合多色染色实验中远红色通道的标记,避免与其它荧光染料的光谱重叠。
流式细胞术
AF647标记的抗体因其高亮度和远红光特性,在多色流式细胞分析中得到广泛应用。它能提高检测灵敏度,同时减少细胞自体荧光的干扰,准确区分不同细胞亚群。
分子探针与核酸标记
AF647羧酸可以偶联到寡核苷酸、探针及引物,用于荧光原位杂交(FISH)、实时定量PCR和分子成像等技术。远红发射使得组织深层成像和活细胞成像更加可靠。
超分辨率显微镜
由于AF647光稳定性和发射特性,它是STORM(随机光学重构显微镜)等超分辨率技术的理想染料,帮助科研人员实现纳米尺度的空间分辨。
活细胞与组织成像
AF647适用于活细胞标记和体内成像研究,兼具低细胞毒性和高信号强度,适合长期跟踪观察细胞动态。
偶联与使用注意事项
偶联前活化
羧酸形式的AF647需要通过EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺)与NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)等试剂活化,形成NHS酯后与目标蛋白质的氨基发生亲核反应,实现共价标记。
反应条件
偶联反应一般在pH 7.2-8.5的缓冲液中进行,避免含有初级胺(如Tris缓冲液)和巯基(如DTT、β-巯基乙醇)的成分,以防干扰反应。
储存与稳定性
AF647羧酸及其偶联物应避光保存于-20°C,防止光漂白和降解,避免反复冻融。
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