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iFluor 488标记鬼笔环肽是一种结合了高性能荧光染料iFluor 488与鬼笔环肽(α-amanitin或其类似环肽毒素)分子的复合物。
偶联原理与合成方法
iFluor 488标记鬼笔环肽通常通过化学方法将iFluor 488活性衍生物(如iFluor 488 NHS酯或Maleimide)与鬼笔环肽上的特定位点(如氨基、巯基)进行共价偶联。偶联反应的要点包括:
选择合适的反应位点:保证偶联不影响鬼笔环肽的生物活性;
温和的反应条件:在pH 7–9的缓冲液中进行,避免蛋白质结构变性;
纯化步骤:通过高效液相色谱(HPLC)等方法去除未反应染料和副产物;
鉴定确认:质谱、紫外-可见光谱及荧光光谱确认偶联成功及纯度。
应用领域
1. 细胞定位与成像
iFluor 488标记鬼笔环肽能特异性结合细胞内的RNA聚合酶II,通过荧光显微镜观察其分布,帮助研究转录调控和细胞核内蛋白复合物的空间动态。
2. 蛋白-蛋白相互作用研究
结合免疫共沉淀等技术,标记后的鬼笔环肽可用于检测与RNA聚合酶II相关蛋白的相互作用,揭示细胞内调控网络。
3. 细胞活性及毒性分析
由于鬼笔环肽的细胞抑制特性,该标记物可用于分析细胞内毒性机制,辅助药物筛选和抗癌机制研究。
4. 多色荧光成像
iFluor 488的绿色荧光便于与红色、远红色等多种染料联合使用,实现多标记、多通道活细胞成像。
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