Cy5.5-labeled human serum albumin，CY5.5标记的人血清白蛋白的反应步骤
人血清白蛋白（Human Serum Albumin, HSA）是一种重要的血浆蛋白，具有良好的生物相容性和载药能力，常作为载体蛋白进行标记。利用CY5.5染料对HSA进行共价标记，是实现蛋白质分子成像和追踪的有效方法。其反应步骤包括蛋白预处理、染料活化、共价偶联、纯化及表征，具体如下：
1. 蛋白质溶液制备
取高纯度HSA粉末，溶解于适宜的缓冲液中（常用PBS，pH 7.4），浓度一般控制在1-10 mg/mL。溶液需过滤除菌，并去除潜在的杂质和低分子量小分子，以保证标记反应的专一性。
2. 染料活化与溶解
CY5.5染料多以NHS酯形式供应，需在干燥且避光条件下储存。标记前，将CY5.5-NHS酯溶解于无水DMSO或DMF中，配制成高浓度的染料储备液，避免水解。
3. 偶联反应条件优化
将CY5.5溶液缓慢滴加至HSA溶液中，保持溶液pH在8.0-8.5，以确保蛋白中赖氨酸侧链的氨基保持适度的非质子化状态，增强亲核性，有利于NHS酯与氨基的酰胺键形成。反应体积及摩尔比依具体标记需求调整，一般染料与蛋白摩尔比控制在5:1至20:1。
4. 反应过程
混合物在室温下轻轻搅拌保护避光反应1-3小时。反应时间过长可能导致非特异性结合或蛋白变性，时间过短则标记率不足。
5. 反应终止及去除自由染料
反应结束后，利用透析、凝胶过滤色谱（如Sephadex G-25）或超滤离心等方法去除未结合的游离染料。此步骤对提高标记纯度及避免背景信号至关重要。
6. 产物浓缩与保存
纯化后的Cy5.5-HSA浓缩至适宜浓度，分装后置于-20℃避光保存，防止降解和荧光猝灭。
7. 产物表征
通过紫外-可见分光光度计检测蛋白和染料的吸收峰（HSA约280 nm，CY5.5约675 nm），计算标记度。结合SDS-PAGE凝胶电泳和荧光扫描验证标记效率及蛋白完整性。
产品名称：Cy5.5-labeled human serum albumin
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc