Cy5.5-MSA，Cy5.5标记小鼠血清白蛋白的制备方法
小鼠血清白蛋白（Mouse Serum Albumin, MSA）是血浆中含量丰富的蛋白质，具有维持血浆渗透压、运输多种小分子及调节血液pH等功能。将近红外荧光染料Cy5.5标记于MSA分子上，不仅赋予其可视化能力，也拓展了其在药物递送、体内分布追踪及分子成像中的应用。以下为Cy5.5-MSA的详细制备方法：
材料准备
纯化的小鼠血清白蛋白，浓度一般为10 mg/mL左右，溶解于PBS缓冲液（pH 7.4）。
Cy5.5-NHS酯粉末，避光保存，标记时溶于干燥的DMSO中备用。
反应缓冲液：PBS或碳酸氢盐缓冲液，pH控制在7.5-8.5以优化NHS酯的活性和蛋白质的稳定性。
反应原理
Cy5.5-NHS酯中的活性酯基能够与MSA分子表面的赖氨酸残基上的游离氨基（–NH2）发生亲核酰胺化反应，形成稳定的共价酰胺键，将Cy5.5牢固连接到MSA蛋白上。
偶联步骤
将Cy5.5-NHS酯溶解于DMSO，配制成所需浓度（一般在1–10 mM范围）。
取一定体积的MSA溶液，缓慢加入Cy5.5溶液，控制摩尔比，一般建议Cy5.5与MSA的摩尔比为5:1至20:1。
反应体系温度控制在室温（20–25℃）下，轻轻旋涡混合，避免剧烈振荡导致蛋白变性。
反应时间一般为2至4小时，确保标记充分。
反应终止与游离染料去除
反应结束后，加入过量的氨基酸（如甘氨酸）或Tris缓冲液，以中和未反应的NHS酯，防止非特异性标记。
利用透析袋（分子量截断约10 kDa）或凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）进行纯化，去除游离Cy5.5染料和小分子杂质。
浓缩与储存
纯化后的Cy5.5-MSA可通过超滤浓缩至所需浓度，便于后续实验使用。
储存条件一般为4℃避光保存，短期保存可保持稳定，长期建议冷冻保存。
质量控制与表征
紫外-可见分光光度法检测Cy5.5和蛋白质的特征吸收峰，计算标记度（每分子蛋白结合的染料数）。
产品名称：Cy5.5-MSA，Cy5.5标记小鼠血清白蛋白
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc