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BSA-CY3,牛血清白蛋白-cy3的制备条件优化

时间:2025-08-14 18:27:49       浏览:16
产品名称:BSA-CY3,牛血清白蛋白-cy3的制备条件优化
实验注意事项
制备条件优化:
BSA的氨基需在碱性条件下充分暴露,避免因空间位阻导致标记效率低下。
CY3的用量需控制在摩尔比(CY3:BSA)为1:1-10:1,避免过度标记影响BSA的蛋白活性(如结合能力)。
反应溶剂需选择对CY3和BSA均兼容的缓冲液(如碳酸盐缓冲液),并控制反应时间以防止BSA变性或CY3分解。
纯化与表征:
通过透析(MWCO 10-30 kDa)或超滤(30 kDa cutoff)去除未反应的CY3,确保产物纯度。
通过荧光光谱(激发波长550 nm,发射波长570 nm)测定标记效率(通常需达到80%以上),并通过SDS-PAGE电泳确认BSA的完整性。
生物相容性评估:
通过细胞毒性实验(如MTT法)验证BSA-CY3对靶细胞(如HeLa细胞、HEK293细胞)的毒性,评估其作为载体的安全性。
需关注CY3是否引发免疫反应(如补体激活),BSA是否导致非特异性细胞吸附。
成像参数设置:
体外成像时,激发光强度需适中(避免荧光淬灭),发射光收集范围需覆盖570 nm±20 nm。
体内成像时,需选择橙红色荧光通道(如CY3的发射光在可见光区,需调整滤光片以减少组织自发荧光干扰)。
蛋白稳定性控制:
BSA-CY3需在生理条件(pH 7.4,4℃)下保存,避免反复冻融导致蛋白聚集。
长期储存时,需加入抗氧化剂(如抗坏血酸)并避光保存,防止CY3降解或蛋白变性。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh


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