Cy5-Asparaginase，CY5标记天冬酰胺酶的制备方法

天冬酰胺酶（Asparaginase）是一种重要的水解酶，其分子由多个氨基酸残基组成，含有活性位点催化天冬酰胺的水解反应。通过Cyanine 5（Cy5）标记形成Cy5-Asparaginase，可用于酶动力学研究、药物递送体系以及荧光示踪实验。其制备方法主要涵盖标记策略、偶联反应、条件优化与纯化表征。

制备方法特点
偶联位点选择
天冬酰胺酶分子中含有多种氨基酸残基，赖氨酸侧链氨基常作为主要偶联位点。通过与Cy5-NHS酯反应生成稳定的酰胺键，可在不破坏酶活性中心的前提下实现荧光标记。偶联过程中需避免覆盖催化活性位点，以保留酶的生物功能。
Cy5偶联反应
溶剂及缓冲体系：一般采用PBS缓冲液（pH 7.2–7.5）溶解酶，并用微量DMSO溶解Cy5-NHS酯。
反应温度：低温（4–25°C）反应可保持酶的构象稳定，防止结构变性。
反应时间：约1–3小时，可通过荧光检测监控偶联进程。
摩尔比控制：Cy5与酶的摩尔比通常控制在1:5至1:10，避免过量标记导致酶活性下降。
纯化策略
透析：去除未反应的Cy5小分子，防止非特异荧光干扰。
凝胶过滤/层析：通过分子量排阻或亲和层析进一步纯化，确保产物为均一Cy5-Asparaginase。
功能与表征
酶活性检测：通过天冬酰胺水解实验验证偶联后酶活性保持情况。
荧光光谱分析：检测Cy5标记强度及稳定性。
质谱或SDS-PAGE：确认偶联效率和分子量变化。
产品名称：Cy5-Asparaginase，CY5标记天冬酰胺酶
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc