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Cy5-ApoB,,Cy5标记载脂蛋白B
Cy5-Apolipoprotein B(Cy5-ApoB)是一种通过共价偶联将Cyanine5(Cy5)染料与载脂蛋白B(ApoB)形成的荧光标记蛋白分子。ApoB为低密度脂蛋白(LDL)的主要蛋白组分,分子量约550 kDa,富含赖氨酸残基及N端氨基,可作为Cy5偶联的反应位点。Cy5-ApoB结合了蛋白功能和远红外荧光特性,可用于蛋白示踪、脂质颗粒研究及分子分布分析。
反应步骤:
蛋白准备
将ApoB溶解于低盐、弱碱性缓冲液(如PBS pH 7.4–8.0),保持蛋白稳定性。
蛋白浓度一般控制在1–5 mg/mL,以保证充分反应同时避免聚集。
染料活化
选用Cy5-NHS酯或Cy5活化酯溶于DMSO或DMF中,避免水解。
根据摩尔比计算所需染料量,通常蛋白与染料摩尔比为1:5–1:10,以获得适中标记度。
偶联反应
将Cy5活化酯缓慢加入蛋白溶液,轻柔搅拌混合。
反应在室温或4°C条件下进行2–4小时,确保N端和赖氨酸残基与活性酯形成酰胺键。
pH控制在7.5–8.5,避免蛋白变性和染料水解。
反应终止与纯化
偶联结束后,可通过透析、凝胶过滤或离心滤膜去除游离染料。
纯化过程中保持缓冲液低盐、pH适中,以保持ApoB结构和功能完整。
产物表征
通过UV-Vis光谱和荧光光谱测定标记度和荧光性能。
SDS-PAGE或质谱可确认蛋白结构完整性和偶联效率。
偶联产物稳定,可在水溶液和生物缓冲液中长期保存,适合后续功能化应用。
产品名称:Cy5-ApoB,,Cy5标记载脂蛋白B
.纯度:95%+
规格:mg/g用途:科研
状态:固体/粉末/溶液

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