CY7.5-Filamin，CY7.5标记丝状蛋白的反应机理概述

CY7.5-Filamin 是通过将丝状蛋白（Filamin，一类多功能细胞骨架蛋白，分子量约 280–320 kDa）与近红外荧光染料 CY7.5 偶联形成的功能化蛋白分子。Filamin 蛋白由多个 Ig 样结构域组成，含有丰富的赖氨酸、半胱氨酸及羧基残基，为化学偶联提供多种活性位点。CY7.5 偶联赋予其荧光追踪功能，可在细胞骨架研究和活体成像中发挥作用。

反应机理概述：
蛋白活性位点识别
CY7.5 标记通常依赖于活化羧基（如 CY7.5-NHS ester）与蛋白的赖氨酸 ε-氨基形成稳定酰胺键。丝状蛋白表面的赖氨酸残基提供了理想的偶联位点，而半胱氨酸残基则可通过马来酰亚胺或二硫键衍生物进行特异性偶联。
偶联反应机理
CY7.5-NHS ester 通过亲核攻击机制与赖氨酸侧链氨基反应。具体步骤如下：
NHS 酯碳原子被赖氨酸氨基进攻，形成四面体过渡态。
过渡态中，NHS 基团离开，形成稳定的酰胺键，将 CY7.5 共价连接至蛋白表面。
这一反应为共价修饰，确保标记稳定且荧光信号可靠。
水相与缓冲体系作用
反应通常在中性至弱碱性缓冲液（pH 7–8）中进行，以保证赖氨酸氨基的亲核性，同时保持蛋白构象。缓冲液中避免含初级胺或巯基竞争物，以免降低偶联效率。
偶联度调控
通过调节 CY7.5 与 Filamin 的摩尔比（1:1–1:5）以及反应时间，可控制标记数量，兼顾荧光强度和蛋白功能保留。过度标记可能影响蛋白折叠和与细胞骨架结合功能。
纯化与表征
偶联完成后，通过透析、凝胶过滤或超滤去除游离染料。SDS-PAGE、紫外-可见吸收和荧光光谱用于验证偶联成功，蛋白功能测定可确保 Filamin 活性未受影响。
产品名称：CY7.5-Filamin，CY7.5标记丝状蛋白
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc