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CY7-Angiogenin,CY7.5标记血管生成素的合成过程
CY7-Angiogenin 是通过将血管生成素(Angiogenin,一种小型核糖核酸酶蛋白)与近红外荧光染料 CY7 偶联形成的标记蛋白。偶联后的蛋白兼具荧光可视化能力和生物功能,为细胞生物学、血管生成研究及分子追踪提供实验平台。
合成过程:蛋白质预处理
将 Angiogenin 溶解于缓冲液(如 PBS, pH 7.4)中,控制浓度以保持蛋白稳定性。
若蛋白质含有自由巯基,可通过适当的保护或活化处理避免非特异偶联,确保结构完整性。
CY7 活化与偶联
CY7 通常以 NHS 酯或 Maleimide 活化形式存在,可与蛋白质赖氨酸氨基或巯基反应形成共价键。
偶联在弱碱性缓冲条件(pH 7–8)下进行,温和搅拌若干小时,确保偶联效率与蛋白活性兼顾。
通过调节 CY7 与 Angiogenin 摩尔比,可控制荧光标记密度,避免过度修饰影响生物功能。
反应终止与稳定化
偶联完成后,加入羟胺或类似封闭试剂终止未反应的活性酯。
保持低温条件和适宜缓冲体系,确保标记蛋白结构稳定。
纯化过程:
去除未反应染料
采用透析或凝胶过滤去除低分子量杂质及未反应的 CY7。
维持溶液 pH 和温度,避免蛋白聚集。
高精度分离
对于要求高纯度的实验,可使用 HPLC(反相或尺寸排阻)分离均一产物。
荧光检测可用于监控标记蛋白分离效果与纯化效率。
表征与验证
紫外-可见光谱与荧光光谱用于确认 CY7 偶联成功。
质谱分析验证蛋白与染料的偶联效率和化学均一性。
活性实验确保 Angiogenin 的核糖核酸酶功能及血管生成相关活性未受影响。
产品名称:CY7-Angiogenin,CY7.5标记血管生成素
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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