Cy7-血清前白蛋白，Cy7-PA，CY7标记血清前白蛋白反应步骤

CY7标记血清前白蛋白（CY7-Prealbumin, CY7-PA）是一种通过将近红外荧光染料CY7共价偶联于血清前白蛋白分子上的复合物。血清前白蛋白（PA，也称甲状腺素结合前白蛋白，Transthyretin, TTR）是一种分子量约55 kDa的四聚体蛋白，由四条相同或相似的亚单位组成，每条亚单位约127个氨基酸残基。PA主要功能是转运甲状腺激素（T4）及视黄醇结合蛋白（RBP）复合物，同时在体液中作为营养状态指标。通过CY7标记，PA获得近红外荧光特性，可用于体外分析、分子示踪及生物成像，同时保留其的折叠结构与功能特性。

反应步骤与偶联机制
蛋白质准备
首先，纯化的血清前白蛋白溶解于适宜的缓冲液中（如PBS或碳酸盐缓冲液，pH 7.4–8.5），浓度通常在1–5 mg/mL范围。此缓冲体系维持蛋白稳定的四聚体结构，同时提供反应所需的弱碱性环境，以促进CY7-NHS酯或CY7-Maleimide的偶联反应。
活性染料选择
CY7通常以NHS酯或马来酰亚胺形式提供：
NHS酯型：可与PA表面赖氨酸残基的氨基反应，形成稳定的酰胺键。
马来酰亚胺型：可与PA的半胱氨酸残基的巯基发生Michael加成，生成稳定的硫醚键。
偶联反应
溶液条件：在弱碱性缓冲液（pH 7.5–8.5）中，加入预先溶解的CY7活性染料。
摩尔比控制：CY7与PA的摩尔比一般控制在1:1至5:1之间，以平衡荧光强度和蛋白功能保持。
反应温度与时间：室温或4°C下反应1–4小时，轻柔搅拌确保均匀混合。该条件温和，避免蛋白变性或四聚体解离。
反应机理
NHS酯偶联：CY7-NHS酯的活性碳与PA赖氨酸氨基发生亲核取代，生成稳定的酰胺键。该过程快速且效率高，产物稳定。
马来酰亚胺偶联：CY7-Maleimide通过Michael加成与半胱氨酸巯基共价结合，形成稳定硫醚键，偶联位点选择性高，避免对蛋白功能区的干扰。
后处理与纯化
偶联完成后，通过透析、凝胶过滤或超滤去除未反应的游离CY7染料。纯化后的CY7-PA可通过UV-Vis光谱和荧光光谱确认标记效率和荧光性能，SDS-PAGE结合荧光检测可验证偶联均一性。
功能与应用验证
结构保持：圆二色谱（CD）或动态光散射（DLS）检测确认PA四聚体结构保持完整。
功能保持：甲状腺素或视黄醇结合实验确保标记后PA仍具结合能力。
荧光性能：激发约750 nm，发射约770–780 nm的近红外信号，用于体外定量分析及体内成像。
应用前景
CY7-PA复合物可用于生物体液中蛋白示踪、体内药物递送研究及近红外成像。其荧光信号提供高灵敏度、低背景的检测，同时保持PA的结构和生物功能，适用于药物递送系统构建、营养状态监测及分子示踪实验。
产品名称：Cy7-血清前白蛋白，Cy7-PA，CY7标记血清前白蛋白
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc