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CY7-Apolipoprotein A1,CY7标记载脂蛋白A1的合成步骤概述
CY7-Apolipoprotein A1(CY7-载脂蛋白A1)是一种将近红外荧光染料CY7共价标记于载脂蛋白A1(Apolipoprotein A1, ApoA1)分子上的功能性蛋白探针。ApoA1是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,分子量约28 kDa,富含赖氨酸和其他性氨基酸残基,具有高度水溶性和生物相容性。通过CY7标记,ApoA1不仅保留其的生物学特性,还获得了近红外荧光信号,可用于蛋白示踪、脂蛋白动力学研究及生物成像实验。
合成步骤概述蛋白溶解与预处理
ApoA1首先在适当缓冲液中溶解(如PBS, pH 7.4),形成均一溶液。为提高偶联效率,可轻微调节pH至7.5–8.0,使赖氨酸残基的氨基保持活性状态,利于与CY7活化试剂反应。
CY7活化
CY7染料通常以NHS酯形式提供,可与蛋白的氨基残基反应形成稳定酰胺键。染料在偶联前溶解于少量无水DMSO或PBS缓冲液中,避免光照和高温,以保持荧光稳定性。
偶联反应
将活化的CY7染料缓慢加入ApoA1溶液中,轻柔搅拌混匀。反应一般在室温下进行2–4小时,或在4℃过夜,以保证充分结合而不破坏蛋白结构。反应过程中可根据蛋白浓度和染料摩尔比控制标记程度,确保荧光强度适中且不影响蛋白功能。
纯化与去除游离染料
反应完成后,需要去除未反应的游离CY7染料。常用方法包括透析(分子量截断小于CY7分子)、凝胶过滤色谱或超滤。透析通常在PBS中多次置换,以彻底清除小分子杂质,获得纯净的CY7-ApoA1。
表征
纯化后的CY7-ApoA1通过紫外-可见光光谱、荧光光谱及SDS-PAGE电泳验证标记成功,同时可测定蛋白浓度和荧光强度,确保复合物稳定且适用于后续实验。
应用
CY7-ApoA1适用于脂蛋白代谢研究、HDL示踪、药物递送验证及体内外生物成像。近红外荧光特性可实现高信噪比成像,帮助研究蛋白在血液、细胞和组织中的分布及动力学。
产品名称:CY7-Apolipoprotein A1,CY7标记载脂蛋白A1
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液

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