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FITC-SBA,荧光素标记大豆凝集素

时间:2025-09-09 11:58:36       浏览:97

FITC-SBA,荧光素标记大豆凝集素

FITC-SBA是将异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate, FITC)通过共价偶联与大豆凝集素(Soybean Agglutinin, SBA)形成的荧光衍生物。SBA是一种来源于大豆的植物凝集素,属于四聚体糖结合蛋白,能特异识别N-乙酰半乳糖胺残基,用于细胞表面糖类结构研究。通过FITC标记,SBA获得绿色荧光(激发约495 nm,发射约520 nm),可用于细胞成像、糖类示踪和分子互作研究。

在结构合成方面,FITC-SBA的关键原理和步骤包括:
偶联位点选择
SBA分子含有多个赖氨酸残基的ε-氨基,可作为FITC偶联的反应位点。
偶联通常选择非活性位点,以保持凝集素的糖结合能力和整体四聚体结构稳定性。
FITC偶联原理
FITC的异硫氰酸基(–N=C=S)与SBA赖氨酸的氨基发生亲核加成反应,生成稳定的硫脲键。
该共价键保证荧光素稳定结合SBA,并在水溶液和缓冲体系中保持荧光信号。
反应条件
偶联在弱碱性缓冲液(如0.1 M 碳酸氢钠缓冲液,pH 8.3–9.0)中进行,以确保赖氨酸氨基非质子化,从而提高反应效率。
反应温和(通常室温或4℃)以防止蛋白质构象变性,反应时间约为1–3小时或过夜。
粗产物处理
偶联反应完成后,通过透析或凝胶过滤去除未反应FITC,得到粗荧光标记蛋白。
该步骤可有效降低游离荧光素对下游实验的干扰。
结构确认
使用紫外-可见吸收光谱(FITC特征峰约495 nm)和荧光光谱(发射约520 nm)确认标记成功。
SDS-PAGE结合荧光扫描可进一步验证FITC-SBA的分子完整性和标记均一性。
结合糖结合实验验证SBA核心活性未受破坏,确保标记蛋白功能保留。
产品名称:FITC-SBA,荧光素标记大豆凝集素
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

状态:固体/粉末/溶液


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