CY5-Lactate dehydrogenase，花菁染料CY5标记乳酸脱氢酶的合成步骤分析
乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）是一种关键的氧化还原酶，催化乳酸与丙酮酸之间的可逆转化。通过与Cy5偶联形成Cy5-LDH，可实现酶的荧光标记，用于酶活性检测、细胞代谢追踪及蛋白质成像研究。
合成步骤分析：
蛋白质准备：
取高纯度乳酸脱氢酶，确保酶活性和结构完整性。
将酶溶解于适宜缓冲液（如PBS或碳酸盐缓冲液，pH 7.2–7.5），避免酶聚集或变性。
缓冲液中可加入少量保护剂（如甘油、EDTA）保护酶活性。
染料选择与预处理：
Cy5通常以NHS酯、Maleimide或活性羧基衍生物形式提供，用于与酶的赖氨酸氨基或半胱氨酸巯基偶联。
染料溶解于DMSO或DMF，避免高浓度有机溶剂破坏酶结构。
染料与酶的摩尔比一般控制在低比例（1:1–1:5）以保持酶活性。
偶联反应步骤：
将Cy5溶液缓慢加入酶溶液中，轻度搅拌反应。
反应温度一般为4°C或室温，反应时间约1–4小时，以避免蛋白质变性。
偶联主要形成酰胺键或硫醚键，保证荧光团与酶核心分离，保留催化位点功能。
纯化与去除游离染料：
通过透析、凝胶过滤或离心滤膜去除未反应Cy5染料。
可使用UV-Vis吸收和荧光光谱确认偶联情况和荧光强度。
SDS-PAGE或凝胶荧光扫描可进一步验证标记蛋白的完整性和均一性。
产品名称：CY5-Lactate dehydrogenase
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc