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CY7-Bovine Fibrinogen,花菁染料CY7标记牛纤维蛋白原的纯化过程

时间:2025-09-24 13:39:39       浏览:66
CY7-Bovine Fibrinogen,花菁染料CY7标记牛纤维蛋白原的纯化过程
花菁染料CY7标记牛纤维蛋白原(CY7-Bovine Fibrinogen, CY7-Fbg)是一种将近红外荧光染料CY7通过共价偶联与牛纤维蛋白原结合形成的功能化分子。牛纤维蛋白原为血浆中重要的可溶性糖蛋白,参与血凝与细胞黏附。CY7-Fbg的制备旨在实现纤维蛋白原的可视化追踪,纯化与表征是确保功能化分子性能稳定的重要环节。
纯化过程:
偶联反应完成后处理:CY7-NHS或CY7-MAL与牛纤维蛋白原的氨基或巯基反应后,得到混合溶液,其中含有未反应的CY7、缓冲盐及副产物。初步通过透析或分子量截滤(Ultrafiltration, MWCO 30–50 kDa)去除小分子杂质。
凝胶过滤纯化:利用凝胶过滤柱(如Sephadex G-25/G-50),可进一步分离偶联产物与未结合的染料分子。CY7-Fbg因分子量大而先于小分子染料洗脱,收集高分子段。
离心和浓缩:纯化后的蛋白溶液通过低速离心去除可能存在的聚集物,再使用超滤浓缩至所需浓度,保持蛋白稳定性。缓冲液通常选择PBS或碳酸盐缓冲液,pH控制在7.2–7.4,防止蛋白变性。
表征方法:
紫外–可见吸收光谱:CY7-Fbg在700–800 nm区间呈吸收峰,对比未标记蛋白和染料的吸收谱,可确认染料成功偶联。
荧光光谱:测定发射峰强度及量子产率,评估荧光性能。CY7标记确保近红外发射,可在体外及体内成像中使用。
SDS-PAGE电泳:通过SDS-PAGE检测蛋白完整性和偶联效率。偶联产物呈现轻微迁移率变化,并可通过凝胶成像仪检测近红外荧光信号。
质谱与毛细管电泳:用于确认分子量增加及偶联数量,进一步验证结构完整性。
产品名称:CY7-Bovine Fibrinogen,花菁染料CY7标记牛纤维蛋白原
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

状态:固体/粉末/溶液


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仅用于科研,不能用于人体。小编axc
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