CY7-Lactate dehydrogenase，花菁染料CY7标记乳酸脱氢酶的反应步骤概述
花菁染料CY7标记乳酸脱氢酶（CY7-LDH）是一种通过CY7荧光染料与乳酸脱氢酶蛋白共价偶联形成的功能化酶分子。乳酸脱氢酶在糖酵解和乳酸代谢中起关键作用，CY7标记使其可在生物体系中实现近红外成像与动态追踪。CY7-LDH的制备步骤包括蛋白准备、荧光偶联及纯化三个关键阶段。
反应步骤概述：
蛋白准备
取纯化乳酸脱氢酶溶液（通常浓度1–5 mg/mL）溶于适宜的缓冲液（pH 7–8）。
调整缓冲液条件以保持蛋白折叠和酶活性，如PBS或碳酸盐缓冲液。
预处理步骤可去除影响偶联的还原剂或小分子杂质。
荧光偶联反应
选择CY7活性形式，如CY7-NHS（对赖氨酸氨基反应）或CY7-MAL（对半胱氨酸巯基反应）。
将CY7溶液缓慢加入LDH蛋白溶液中，摩尔比可根据标记需求调整（通常为1:1到5:1）。
在室温或低温下反应1–2小时，确保羧基/氨基或巯基充分与CY7发生亲核攻击形成稳定共价键。
反应控制
控制pH、温度和反应时间，防止蛋白结构变性或酶活性下降。
可通过轻微搅拌或缓慢滴加CY7溶液，保证反应均匀性并避免局部高浓度导致蛋白沉淀。
反应终止与稳定化
反应完成后，可加入过量甘氨酸或氨基缓冲液终止未反应的CY7-NHS。
若使用CY7-MAL，则通过轻微氧化条件稳定形成的硫醚键，保证标记牢固性。
纯化与验证
通过透析、分子量截滤或凝胶过滤去除未反应的CY7染料。
使用紫外–可见光吸收、荧光光谱及酶活性测定确认偶联效率和酶功能保持情况。
酶标记后的LDH应保持接近原始酶活性，同时具有稳定近红外荧光信号。
储存与应用
产品名称：CY7-Lactate dehydrogenase，花菁染料CY7标记乳酸脱氢酶
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

推荐产品：

异硫氰酸荧光素标记棕榈酸
FITC-Palmitic acid
异硫氰酸荧光素-甲氧基聚乙二醇；FITC-MPEG
异硫氰酸荧光素-羧基；FITC-COOH
吲哚菁绿ICG
3599-32-4
吲哚菁绿-laminin蛋白
ICG-laminin

仅用于科研，不能用于人体。小编axc