Cy7-Ceruloplasmin，花菁染料CY7标记铜蓝蛋白的具体合成步骤
花菁染料CY7标记铜蓝蛋白（Cy7-Ceruloplasmin, Cy7-CP）是一种将近红外荧光染料CY7与铜蓝蛋白（Ceruloplasmin, CP）通过共价偶联形成的功能化蛋白分子。铜蓝蛋白是一种多铜氧化酶，参与铁代谢和调控，CY7标记赋予其可视化功能，用于生物成像、分布追踪及蛋白动力学研究。
具体合成步骤
蛋白溶液准备
将铜蓝蛋白溶解于PBS或碳酸氢盐缓冲液中，pH通常调至7.2–8.0，浓度控制在1–5 mg/mL。
蛋白需保证单分散，避免聚集，必要时可进行超滤或轻度透析。
染料活化
CY7-NHS酯或其衍生物溶于少量DMSO中，以保持酯活性。
活化的Cy7可与蛋白表面赖氨酸残基的氨基反应，形成稳定酰胺键。
偶联反应
将CY7溶液缓慢加入CP溶液中，维持反应温度在4℃或室温下，轻柔搅拌以保护蛋白活性。
反应时间通常为2–12小时，具体取决于所需标记度和蛋白量。
染料与蛋白摩尔比需优化，避免过度标记造成蛋白结构破坏。
反应终止
添加Tris或甘氨酸溶液终止未反应的NHS酯。
轻轻搅拌均匀，确保反应彻底停止。
纯化
使用透析、凝胶过滤或超滤去除未偶联染料和小分子杂质。
通过UV-Vis光谱确认Cy7标记峰（约750 nm），并计算标记度。
SDS-PAGE或毛细管电泳用于检测蛋白完整性和标记效果。
储存
Cy7-CP在–20℃避光储存，防止荧光衰减和蛋白失活。
使用前复溶并轻轻混匀，避免重复冻融。
特点与应用
保留铜蓝蛋白的多铜酶活性和生物功能。
近红外荧光适合深层组织成像与体内动态追踪。
可用于研究铁代谢、反应及蛋白在体内分布和药物载体应用。
产品名称：Cy7-Ceruloplasmin，花菁染料CY7标记铜蓝蛋白
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc