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CY7-Wheat germ agglutinin,花菁染料CY7标记小麦胚芽凝集素的反应条件

时间:2025-09-24 14:19:55       浏览:86
CY7-Wheat germ agglutinin,花菁染料CY7标记小麦胚芽凝集素的反应条件
花菁染料CY7标记小麦胚芽凝集素(CY7-WGA)是通过将近红外荧光染料CY7与WGA蛋白共价偶联形成的功能化分子。WGA是一种来源于小麦胚芽的凝集素,能够特异性结合N-乙酰氨基葡萄糖和唾液酸残基,应用于细胞膜和糖蛋白标记。CY7标记赋予其近红外荧光特性,使其在细胞成像、受体分布分析和生物界面研究中具有高灵敏度应用价值。
反应条件
蛋白溶液条件
WGA溶解于生理缓冲液(如PBS, pH 7.2–7.4),浓度一般为1–5 mg/mL。
保证蛋白分子稳定,避免聚集和变性,必要时可轻微超滤除杂质。
染料准备
CY7-NHS酯或其水溶性衍生物在DMSO中溶解,保持羧酸活性酯功能完好。
溶液需避光处理,防止光降解,且保持低浓度以减少蛋白非特异性修饰。
pH与温度条件
反应体系pH控制在7.2–8.0,有利于赖氨酸残基氨基处于非质子化状态,提高偶联效率。
反应温度通常在4℃或室温进行,低温可降低蛋白变性风险。
摩尔比与反应时间
CY7与WGA的摩尔比一般控制在1:1至5:1,根据所需标记密度调整。
反应时间为2–12小时,可通过小试优化,以平衡标记效率和蛋白活性。
反应终止
通过加入Tris、甘氨酸或其他含氨基缓冲液终止未反应的NHS酯。
混合均匀,确保残余活性酯完全失活,避免非特异性修饰。
溶液和体系要求
避免高盐和强还原剂,防止影响蛋白结构和荧光稳定性。
搅拌需轻柔,减少蛋白聚集,保证荧光标记均匀性。
后处理
反应完成后通过透析、凝胶过滤或超滤去除游离染料和低分子杂质。
UV-Vis光谱测定Cy7吸收峰(约750 nm)可估算标记度。
产品名称:CY7-Wheat germ agglutinin
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

状态:固体/粉末/溶液


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