Sulfo-CY5-SA，磺酸基CY5标记链霉亲和素的反应步骤概述
Sulfo-CY5-Streptavidin是一种将水溶性荧光染料CY5通过磺酸基修饰与链霉亲和素（Streptavidin, SA）偶联形成的功能分子。SA蛋白对Biotin具有高亲和力，结合CY5荧光和磺酸基水溶性，使Sulfo-CY5-SA在生物标记、免疫检测、纳米载体追踪及分子成像中应用。
反应步骤概述：
CY5染料活化：
CY5羧基通过磺酸基NHS酯活化生成Sulfo-CY5-NHS。
NHS酯活化形式对蛋白质游离氨基高度亲核，便于形成稳定酰胺键。
SA蛋白准备：
SA溶解于缓冲液（通常pH 7.4–8.5），保持蛋白四聚体结构完整。
调节蛋白浓度，保证反应均匀，同时维持Biotin结合活性。
偶联反应：
Sulfo-CY5-NHS与SA蛋白中赖氨酸侧链和N端氨基反应，形成稳定酰胺键。
反应温和（室温或低温）进行，避免蛋白变性。
根据需要调整染料与蛋白摩尔比，控制标记密度，确保荧光强度同时保持SA生物活性。
反应条件优化：
pH 7.4–8.5，缓冲液常用PBS或碳酸氢盐缓冲液。
反应时间通常1–3小时，根据蛋白和染料浓度调整。
避免光照，减少CY5光漂白。
纯化与表征：
通过透析、凝胶过滤或HPLC去除未反应染料。
UV-Vis光谱及荧光光谱验证荧光强度及吸收峰。
SDS-PAGE或质谱可验证偶联成功与标记比例。
保证标记后的SA仍保持Biotin结合功能。
应用特点：
高水溶性和生物相容性，适用于体外免疫检测、原位杂交、流式细胞分析及体内成像。
CY5红光荧光信号适合多色荧光实验，可与绿光或蓝光荧光染料组合使用。
产品名称：Sulfo-CY5-SA，磺酸基CY5标记链霉亲和素
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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