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Cy5-lactalbumin,菁染料Cy5标记乳清蛋白的制备方法 Cy5-lactalbumin是一种通过化学偶联将近红外荧光染料Cy5标记于乳清蛋白(Lactalbumin, LA)上的生物标记物

时间:2025-09-25 14:21:43       浏览:79
Cy5-lactalbumin,菁染料Cy5标记乳清蛋白的制备方法
Cy5-lactalbumin是一种通过化学偶联将近红外荧光染料Cy5标记于乳清蛋白(Lactalbumin, LA)上的生物标记物。乳清蛋白是牛乳和人乳中的重要蛋白质,具有良好的生物相容性和可溶性,常用于药物载体、营养补充及蛋白研究。通过Cy5标记,乳清蛋白可实现荧光可视化,从而便于在体内外实验中追踪蛋白的分布、吸收与代谢。
制备方法:
材料准备:
乳清蛋白(Lactalbumin)纯化粉末或溶液。
Cy5-NHS酯活化荧光染料。
磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2–7.5)或碳酸盐缓冲液(pH 8.0–8.5)。
去离子水、乙醇或DMSO用于溶解染料。
偶联反应原理:
Cy5-NHS酯可与乳清蛋白表面赖氨酸的氨基反应,形成稳定的酰胺键。
偶联反应在温和条件下进行,避免蛋白变性或活性丧失。
反应比例一般为蛋白:染料 1:5–1:10,以控制标记密度,保证蛋白结构和功能完整。
操作步骤:
将乳清蛋白溶解于缓冲液中,调节pH至适合NHS酯反应的范围(约7.4–8.0)。
将Cy5-NHS酯溶于少量DMSO或乙醇中,缓慢加入蛋白溶液。
轻轻搅拌室温反应1–2小时,或在4°C条件下过夜,以充分完成偶联。
纯化与处理:
偶联完成后,通过透析、凝胶过滤或超滤去除未反应的自由染料。
可利用UV-Vis吸收光谱和荧光光谱确认标记效率及蛋白浓度。
纯化后的Cy5-lactalbumin可在PBS或适当缓冲液中储存,避免高温和强光照射,以保持荧光和蛋白稳定性。
特性与应用:
Cy5-lactalbumin保持乳清蛋白的水溶性和生物相容性,同时具备Cy5的红外荧光特性。
可用于细胞摄取实白验、蛋白运输研究、药物递送载体评估及体内荧光成像。
产品名称:Cy5-lactalbumin,菁染料Cy5标记乳清蛋白
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

状态:固体/粉末/溶液


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