FITC-Cysteine，异硫氰酸荧光素标记半胱氨酸的反应原理
半胱氨酸（Cysteine, C₃H₇NO₂S）是一种含硫氨基酸，其分子中含有一个α-氨基（–NH₂）、一个羧基（–COOH）和一个活性硫醇基（–SH）。FITC-Cysteine是通过异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate, C₂₁H₁₂O₅N₂S）与半胱氨酸的氨基共价连接形成的标记化合物，其核心结构为硫代脲键（–NH–C(=S)–NH–），将荧光素稳定地连接到氨基酸分子上。标记后的分子兼具半胱氨酸的亲水性和FITC的绿色荧光特性，λ_max约495 nm，λ_em约520 nm。
反应原理
FITC-Cysteine的形成基于异硫氰酸基（–N=C=S）与α-氨基的亲核加成反应。其主要机理如下：
亲核攻击：半胱氨酸的自由氨基氮原子对FITC异硫氰酸碳原子发起亲核攻击。
中间体生成：形成瞬态中间体，随后重排生成稳定的硫代脲键。
反应条件：反应通常在弱碱性缓冲液（pH 8–9）中进行，以提高氨基的亲核性，同时避免硫醇氧化或FITC光漂白。
选择性：硫醇基未直接参与反应，可保留其化学活性，用于后续金属离子络合或巯基交联实验。
特点与性质
水溶性与生物相容性：FITC-Cysteine水溶性良好，分子量低（约415 Da），可在体外及细胞实验中使用。
荧光特性：FITC荧光稳定，可用于荧光显微镜、流式细胞术及酶标仪分析，光漂白速度较慢。
化学稳定性：硫代脲键在中性或弱碱条件下稳定，不易水解，同时保留半胱氨酸的硫醇化学活性。
反应便捷性：反应温和，无需高温或强酸碱，可直接在水溶液体系中进行。
多功能性：标记后的半胱氨酸既可作为荧光探针，又可通过硫醇参与金属离子配位、交联反应或其他生物化学修饰。
应用价值
FITC-Cysteine常用于氨基酸摄取、蛋白质定位及硫醇功能分析实验中，可作为荧光追踪分子研究蛋白质构象变化及配体结合。同时适用于共聚焦显微镜、流式分析和荧光光谱定量实验。其小分子量、荧光稳定性和保留硫醇功能，使其在生物化学和化学修饰实验中具有应用。
储存与使用
产品名称：FITC-Cysteine，异硫氰酸荧光素标记半胱氨酸
纯度：95%+
规格：mg/g

用途：科研

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc