ATTO 647 DBCO的反应步骤
ATTO 647 DBCO 是一种将 ATTO 647 荧光染料与 DBCO（Dibenzocyclooctyne）官能团结合的活性衍生物，属于远红光荧光探针，激发峰约 645 nm，发射峰约 669 nm。ATTO 647 具有高量子产率、光稳定性强、低自发荧光背景的特点，用于细胞成像、免疫标记、分子追踪和体内深部成像。DBCO 官能团是一种应变炔，可在无铜条件下与叠氮（–N₃）基团发生快速的 SPAAC（strain-promoted azide–alkyne cycloaddition）点击反应，实现高选择性和高效率的生物正交偶联。
反应步骤
准备叠氮化底物
被标记分子（蛋白质、抗体、核酸或纳米颗粒）需预先引入叠氮基团，可通过 N₃-NHS ester、N₃-Mal 或其他叠氮化试剂修饰氨基或巯基。
确保叠氮基修饰比例适中，避免多重偶联导致结构改变或功能丧失。
溶液配制
将 ATTO 647 DBCO 溶解于 DMSO 或缓冲液（如 PBS, pH 7.4）制备储备液。
反应体系中 ATTO 647 DBCO 与叠氮底物摩尔比通常为 1.2–2:1，以确保充分偶联而减少过量残留。
点击偶联反应
将 DBCO 与叠氮修饰底物混合，室温下孵育 1–4 小时。
该反应无需铜催化，无毒副作用，适合活细胞或体内应用。
反应速度与底物浓度、温度、缓冲液组成有关；常在 pH 7.0–8.0 进行。
反应监控
可使用 HPLC、UV-Vis 或荧光光谱监测偶联效率。
荧光信号增强表明染料已成功结合到底物上。
纯化
通过透析、凝胶过滤（Sephadex G-25/G-50）、离子交换或反相 HPLC 去除未反应的染料和副产物。
收集纯化产物并使用 UV-Vis 或质谱验证。
表征
荧光光谱：激发 645 nm，发射 669 nm，确保信号强度与染料特性一致。
MS/NMR（如适用）可用于确认偶联成功及分子完整性。
应用优势
SPAAC 点击反应高选择性、无铜催化，适用于活细胞及体内标记。
远红光谱信号强，穿透力好，适合深部组织成像。
产品名称：ATTO 647 DBCO
纯度：95%+
规格：mg/g

用途：科研

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