水溶性 CY5-活性酯（磺酸基 sulfo-CY5-NHS） 是一种功能性荧光染料衍生物，由 CY5 染料核心通过共轭体系连接到末端 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯官能团，并在染料结构上引入磺酸基（–SO₃⁻）以增强水溶性。CY5 染料属于氰基染料家族，具有长波长荧光发射（约 660–670 nm），接近红外区，可减少生物样品自发荧光干扰，便于高灵敏度检测和成像。NHS 酯端为典型的活性官能团，可与初级氨基或修饰氨基发生亲核加成反应，形成稳定的酰胺键，实现分子偶联和荧光标记。磺酸基的引入显著增强了染料在水相环境中的分散性和操作性，减少疏水聚集，使其适合生物体系中的标记和功能化应用。

花青素-氨基 是指在花青素分子结构上引入可反应的氨基官能团，使其能够与活性酯类分子（如 sulfo-CY5-NHS）进行共价偶联。氨基端具有典型的亲核性，可与 NHS 酯在温和条件下形成稳定的酰胺键，从而将花青素分子标记上荧光染料，实现可追踪化学修饰。氨基的存在提高了花青素在水相或有机溶剂中与活性酯反应的效率，使偶联产物在生物体系中分散均匀。

化学反应原理：磺酸基 sulfo-CY5-NHS 与花青素-氨基的偶联反应依赖于 NHS 酯与初级氨基的亲核加成。在缓冲液或水相条件下，氨基对 NHS 酯进行进攻，生成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰亚胺副产物。该反应温和、选择性高，可在室温下完成，并避免染料光衰或花青素结构破坏。磺酸基的水溶性作用有助于反应体系均一，减少非特异性吸附和染料聚集。

应用特点：

1. 功能化探针构建：通过磺酸基 sulfo-CY5-NHS 与花青素-氨基偶联，可生成荧光标记花青素分子，用于分子追踪、结合分析及成像研究。

2. 蛋白质及小分子偶联：偶联体系可进一步与蛋白质、肽链或功能化小分子结合，构建多功能探针或分析平台。

3. 水相体系应用：磺酸基增强水溶性，偶联产物在水溶液或缓冲液中分散均匀，适合体外实验及生物成像。

操作与纯化：偶联反应在缓冲液或水溶液中进行，避光操作可保持荧光强度。反应完成后，可通过透析、反相 HPLC 或硅胶柱层析纯化，获得高纯度偶联产物。

厂家：瑞禧生物

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Cy3.5标记黄芪多糖
Cy3.5标记黄芪多糖制备原理
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polysaccharide
Cyanine3-APS