Streptavidin, AF647 Conjugate：结构与应用

结构概述
Streptavidin 是一种来源于链霉菌的四聚体蛋白，每个亚基约 16 kDa，具有极高的生物素结合能力（Kd ≈ 10^-14 M），且几乎不与其他天然分子结合。其独特的四聚体结构形成四个等效的生物素结合位点，使其在生物学实验中成为理想的生物素标记受体。AF647（Alexa Fluor 647）是一种红色荧光染料，具有较长激发波长（650 nm）和发射波长（668 nm），光稳定性高，不易光漂白。Streptavidin 与 AF647 的共轭通常通过 NHS 酯或其他化学反应，将染料共价连接到蛋白质的赖氨酸残基上，从而保持 Streptavidin 的生物素结合能力，同时赋予荧光信号。

应用原理
AF647 共轭的 Streptavidin 主要用于标记或检测生物素化分子，例如抗体、核酸、糖类或小分子配体。通过生物素-亲和素体系，用户可以实现高特异性和高灵敏度的信号放大。其长波长荧光可避免细胞自身荧光干扰，提高成像质量，尤其适合多重荧光实验。此外，AF647 的高光稳定性使其适用于长时间的显微镜成像或流式细胞分析。

应用场景

1. 荧光显微镜：用于标记细胞膜受体或胞内生物素化蛋白，实现高对比度成像。

2. 流式细胞术：结合生物素化抗体，可对特定细胞群体进行定量分析。

3. 免疫印迹：在 Western blot 实验中，通过 Streptavidin-AF647 检测生物素化抗体信号，提高灵敏度。

4. 蛋白质或核酸检测：在 ELISA 或原位杂交实验中，用于信号放大和荧光检测。

优势特点

• 高亲和力：几乎不可逆地结合生物素，提高实验可靠性。

• 光学性能优良：激发/发射波长适合红色通道，背景干扰低。

• 可多用途：适用于多种实验平台，包括显微成像、流式分析和蛋白检测。

总体而言，Streptavidin, AF647 共轭是一种结合了高特异性生物素识别和良好红色荧光信号的多功能试剂，广泛用于分子和细胞生物学研究中。