6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯（6-ROX NHS，6-ROX, SE）是一种常用的荧光标记试剂，属于罗丹明类染料衍生物，其分子结构由6-羧基罗丹明核心和活性琥珀酰亚胺酯（NHS-ester）组成。罗丹明骨架具有高度共轭的芳香结构，提供强烈的橙红色荧光，激发波长约为540至560纳米，发射波长约为570至590纳米，光稳定性较好，量子产率高。6-羧基位点是罗丹明分子上可活化的功能团，通过NHS酯化处理后，形成对伯胺和羟基敏感的活性化合物，能够与蛋白质、肽链、核酸以及含氨基的小分子发生共价偶联，从而实现荧光标记。

在反应条件方面，6-ROX NHS的偶联反应属于NHS酯与伯胺的亲核加成反应。通常在中性或微碱性缓冲液（pH 7.0至9.0）中进行，以保证酰胺键的形成效率并保持底物活性。反应一般在室温或低温条件下进行，避免高温造成荧光染料分解或底物失活。由于NHS酯对水分敏感，反应体系应尽量减少游离水的存在，可使用有机溶剂辅助溶解，如二甲基亚砜、乙醇或N,N-二甲基甲酰胺等。反应时间通常为数小时至一昼夜，根据底物浓度和NHS酯摩尔比调整。为控制标记效率，可使用适量过量的6-ROX NHS，同时避免过度标记造成底物活性丧失。偶联完成后，可通过透析、凝胶过滤或反相高效液相色谱（HPLC）去除未反应的荧光染料和副产物，得到纯净的荧光标记产物。

在合成过程研究方面，6-ROX NHS的制备通常以6-羧基罗丹明为前体，通过活化羧基形成NHS酯实现。具体方法为将6-羧基罗丹明与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）和适量的偶联剂如二环己基碳二亚胺（DCC）或EDC·HCl在干燥有机溶剂中反应，生成6-ROX NHS。在反应过程中，DCC或EDC与羧基活化形成O-酸酯中间体，随后NHS进攻羧酸活化中间体生成稳定的琥珀酰亚胺酯。整个反应需在无水环境下进行，以防水解造成NHS酯失活。反应完成后，生成的NHS酯产物通常通过过滤去除沉淀的偶联副产物如二环己基尿素，再经过柱层析或重结晶纯化，得到高纯度的6-ROX NHS。研究表明，溶剂类型、反应温度和底物浓度对产物产率和纯度影响显著，因此优化这些条件是合成研究的重点。此外，6-ROX NHS应避光、低温保存，以保持NHS酯活性和荧光性能。

6-ROX NHS作为荧光标记工具，在生物分子标记和检测中应用广泛。其合成过程中关键在于羧基活化、NHS酯形成和纯化，反应条件要求温和、无水和避光，以确保产物稳定性和功能性。通过合理设计和优化反应条件，可获得高纯度、高活性的6-ROX NHS，用于蛋白质、肽链和小分子的荧光标记实验，为荧光成像、流式细胞分析和分子探针开发提供可靠的化学基础。

厂家：瑞禧生物

产品目录

AF647标记溶血磷脂酰胆碱 AF647-LPC
AF647标记羧甲基壳聚糖 AF647-Carboxymethyl chitosan
AF647标记万古霉素 AF647-Vancomycin
AF647标记伊维菌素 AF647-Ivermectin
AF647-二苯并环辛炔，AlexaFluor647-DBCO，