Sulfo-Cy3.5-FAPI-4（磺化-Cy3.5-成纤维细胞活化蛋白抑制剂-4）是一种将水溶性近红外荧光染料Sulfo-Cy3.5与成纤维细胞活化蛋白抑制剂-4（FAPI-4）偶联形成的功能化分子。该偶联分子结合了Sulfo-Cy3.5的荧光可视化性能和FAPI-4的靶向FAP（Fibroblast Activation Protein）能力，可用于肿瘤微环境成纤维细胞的成像、药物递送追踪及靶向研究。Sulfo-Cy3.5染料提供激发波长约630 nm、发射波长约650–660 nm的近红外荧光信号，磺酸盐修饰赋予水溶性和生物相容性，而FAPI-4骨架保留了可反应的氨基或羟基官能团，为偶联反应提供关键化学位点。

合成过程研究概述

1. 活性染料的制备与磺化改性
   Sulfo-Cy3.5通常通过磺酸化修饰引入水溶性磺酸基，同时在染料末端生成活性官能团，如NHS酯。磺酸化提高了染料在水相中的溶解度，减少疏水性聚集现象，同时提供负电荷以增强生物体系兼容性。活性NHS酯基团为FAPI-4分子提供可高效偶联的亲电中心，是偶联反应的核心。染料在缓冲液或含少量有机溶剂（如DMSO）的体系中溶解，以保证分子活性和均匀性。

2. FAPI-4分子前处理
   FAPI-4分子含有自由氨基或羟基等亲核官能团，在弱碱性条件下（pH 7.5–8.5）氨基保持未质子化状态，从而增强亲核性。为了保证FAPI-4骨架结构完整和靶向活性，前处理过程中通常采用低温缓冲溶液，并避免极端pH或强氧化条件。该步骤为后续高效偶联奠定基础。

3. 偶联反应机理与过程
   偶联反应主要依赖FAPI-4分子氨基对Sulfo-Cy3.5-NHS酯的亲核加成。氨基攻击活性碳酰中心，形成四面体过渡态，随后离去N-hydroxysuccinimide生成稳定酰胺键。该过程温和、特异性高，可在低温下进行，避免荧光染料光漂白和FAPI-4骨架破坏。通过调节染料与FAPI-4摩尔比，可控制偶联度，实现荧光信号强度与靶向结合能力的平衡。

4. 反应条件优化
   合成过程中，温和的缓冲液体系和低温控制是保证偶联效率和分子稳定性的关键。弱碱性环境保证FAPI-4氨基高亲核性，同时避免染料降解或荧光猝灭。反应时间一般为数小时至十几小时，根据偶联效率和分子稳定性调整。反应体系中可添加少量有机溶剂以改善溶解度，但需避免影响荧光性能。

5. 纯化与分离
   反应完成后，体系中含有Sulfo-Cy3.5-FAPI-4偶联产物、未反应染料和少量副产物。常用纯化方法包括凝胶过滤、透析和反相高效液相色谱（HPLC）。凝胶过滤和透析可有效去除低分子杂质和自由染料，HPLC可实现高分辨率分离并获得纯度定量信息。纯化后的产物水溶性良好，光学性能稳定，可直接用于生物实验。

6. 产物表征
   纯化后的Sulfo-Cy3.5-FAPI-4需通过紫外-可见光谱、荧光光谱和质谱进行表征。UV-Vis光谱确认染料骨架完整，荧光光谱检测激发与发射波长及荧光强度，质谱分析验证分子量及偶联成功。偶联效率可通过荧光定量或比色法评估，确保产物的均一性和可重复性。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7.5-Stachyose，CY7.5水苏糖的
CY7.5-Salicylic acid，CY7.5水杨酸的
CY7.5-Silk fibroin，CY7.5丝素蛋白的
CY7.5-Fibrinogen，CY7.5纤维蛋白原的
CY7.5-Transferrins，CY7.5转铁蛋白的