Fluo-4 AM 是一种广泛应用于活细胞钙离子成像的荧光探针，属于钙离子指示剂（Ca²⁺荧光探针）家族。它由 Fluo-4 核心荧光基团和可裂解的乙酸酯化保护基团（AM，即 acetoxymethyl ester）构成，能够跨越细胞膜并在胞内被酯酶水解释放出带电的 Fluo-4，从而与自由钙离子结合产生强烈荧光信号。Fluo-4 AM 的光学特性适合活细胞显微成像：激发峰约在 494 nm，发射峰约在 516 nm，信号强、响应快速，并且比其前体 Fluo-3 对钙离子具有更高的灵敏度和亮度。

Fluo-4 AM 的分子结构主要包含以下几个部分：

1. Fluo-4 核心：由荧光素类衍生的共轭体系构成，提供稳定的光学信号，能够与 Ca²⁺ 配位形成荧光增强复合物。

2. 乙酸酯化保护基团（AM）：氨基酸或羧基上的羟基通过乙酸酯化保护，使分子中性且疏水，可穿透细胞膜。进入胞内后，细胞内非特异性或特异性酯酶水解这些 AM 基团，释放带电的荧光活性分子，从而锁定于胞内环境中。

Fluo-4 AM 的合成可概括为以下几个主要步骤：

1. 荧光核心构建
Fluo-4 的荧光核心通常从羧基荧光素或其衍生物出发，通过芳香化学反应和羟基、氨基保护策略，构建出能够与钙离子特异性结合的结构单元。该步骤的目标是形成具有高量子产率的共轭体系，同时在关键位点预留可进一步修饰的羟基或氨基。

2. 钙结合位点引入
Fluo-4 的化学设计包含能与 Ca²⁺ 配位的羧酸或氨基酸衍生基团，这些位点通过亲核取代或酯化反应引入到荧光核心上。此步骤确保荧光信号与 Ca²⁺ 结合高度相关，并赋予分子对钙离子的高选择性和快速响应特性。

3. AM 保护基团化
Fluo-4 的羧酸或羟基在合成过程中通过乙酸酯化处理，引入 acetoxymethyl (AM) 保护基团。AM 基团使分子整体呈中性和疏水性，从而能够穿透细胞膜。该步骤通常在无水或微水环境下进行，使用适当的酯化试剂和催化剂，使保护基团以高选择性结合于目标位点，同时避免荧光核心的结构破坏。

4. 纯化与稳定化
合成完成后，Fluo-4 AM 需要通过柱层析、反相 HPLC 或其他分离方法纯化，去除未反应的底物、杂质和副产物。由于 AM 基团对水和酶敏感，纯化过程需避光、低温和无水环境，以保证分子稳定性和荧光性能。纯化后的产物通常以干粉或有机溶剂溶液形式储存，并在使用前溶解于适宜的载体或缓冲液中。

5. 表征与验证
Fluo-4 AM 的结构和性能可通过多种方法进行表征，包括质谱确认分子量，核磁共振 (NMR) 验证关键结构单元，紫外-可见吸收和荧光光谱测定荧光特性。同时，可通过细胞水平的荧光实验验证 AM 基团的细胞穿透能力及酯酶水解后的信号增强性能。

厂家：瑞禧生物

产品目录

IR-1048-Maleimide
IR1048-Me-Tetrazine
IR-1048-Me-Tetrazine
IR1048-NH2
IR-1048-NH2
IR-1048-NHS ester