AF514 NHS Ester 是基于 Alexa Fluor 514（AF514）荧光染料的功能化衍生物，其末端通过 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活性酯 修饰，能够与蛋白质、多肽或其他含初级胺的生物分子共价偶联。AF514 属于绿色荧光染料，激发波长约为514 nm，发射波长约为525 nm，光稳定性好、水溶性佳，适合多通道成像、荧光标记和分子示踪实验。NHS 酯官能化赋予 AF514 在温和条件下高效、可控的生物分子标记能力。

一、化学特性

1. 荧光核心
   AF514 荧光团由共轭芳香结构组成，具有高量子产率和良好光稳定性，能在可见光区产生明亮、稳定的绿色荧光。共轭体系结构使其适用于荧光显微镜、流式细胞仪以及多通道成像实验。

2. NHS 酯官能化
   NHS 酯能够与生物分子中的初级胺形成酰胺键，反应特异性高、温和且不可逆。这一特性使 AF514 NHS Ester 可实现蛋白质、抗体、多肽或其他含胺分子的高效标记。

3. 水溶性与操作兼容性
   AF514 NHS Ester 保持染料的水溶性，便于在缓冲液或生物体系中操作，同时反应条件温和，避免蛋白质变性或荧光团降解。

二、合成步骤概述

AF514 NHS Ester 的制备通常包括 荧光前体制备、羧基活化和 NHS 偶联 三个主要步骤：

1. 荧光前体制备
   首先合成 AF514 荧光前体，通常包含具有羧基可修饰位点的 Alexa Fluor 514 核心。前体分子在结构上保留活性羧基，同时确保荧光团的共轭体系完整，以维持其光学性能。前体的制备通常通过芳香化合物缩合或环化反应形成稳定的荧光核心。

2. 羧基活化
   荧光前体的羧基通过化学活化形成可反应的活性中间体。常用方法是将羧基与 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS） 及 EDC（1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺） 反应生成 NHS 酯中间体。该步骤通常在干燥有机溶剂（如 DMF 或 DMSO）中进行，以防止水解并保证活性酯形成完全。

3. NHS 偶联形成
   活化后的荧光前体与 NHS 反应生成最终的 AF514 NHS Ester。生成的活性酯官能团稳定，在干燥条件下可长时间保存，同时在水性缓冲液中能够快速与含胺生物分子反应形成酰胺键。

4. 纯化与表征
   合成完成后，通过高效液相色谱（HPLC）或柱层析纯化 AF514 NHS Ester，去除未反应前体、副产物及残余试剂。纯化后的产物通过质谱（MS）、核磁共振（NMR）及荧光光谱进行验证，确保结构正确、纯度高且荧光性能完整。

厂家：瑞禧生物

产品目录

IR-1048-Me-Tetrazine
IR1048-NH2
IR-1048-NH2
IR-1048-NHS ester
IR-1048-NHS-ester