iFluor 568 Styramide，中文名称可表述为 iFluor 568 酪胺染料，是一类将近红外荧光染料 iFluor 568 与酪胺（Tyramide）基团共价连接的功能性荧光探针。该分子结合了 iFluor 568 的明亮荧光特性和酪胺的可催化沉积能力，使其在免疫组化、酶促信号放大（TSA, Tyramide Signal Amplification）以及细胞或组织成像中广泛应用。酪胺部分在过氧化物酶（如 HRP）催化下生成自由基，可与附近的蛋白质酪氨酸残基共价结合，从而实现标记信号的局部放大。iFluor 568 的发射波长约在 600 nm 左右，光学稳定性高，适合在多重荧光实验中与其他染料配合使用。

合成概述：

1. iFluor 568 活性衍生物制备
   合成 iFluor 568 Styramide 的第一步是将 iFluor 568 染料末端的羧基或其他官能团活化，通常制备为 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯或同类活性酯。通过 NHS 酯化反应，染料羧基被转化为亲电活性位点，便于与酪胺的氨基偶联。反应多在干燥、无水溶剂环境下进行，如使用 DMF 或 DMSO，以避免 NHS 酯水解，同时保持染料光学性能。

2. 酪胺（Tyramide）前体准备
   酪胺前体通常保留一个自由伯胺官能团，用于与 NHS 酯偶联。为了提高偶联效率，有时需对酪胺氨基进行保护和去保护操作，保证氨基在偶联反应中处于可控活性状态。酪胺的苯环可在后续实验中通过 HRP 催化参与自由基沉积，实现信号放大。

3. 偶联反应
   iFluor 568 NHS 酯与酪胺的氨基在温和条件下进行酰化偶联，形成稳定的酰胺键。反应通常在缓冲液或水-有机混合体系中进行，pH 控制在 7.5–8.5 之间，以确保氨基亲核性，同时保护染料共轭体系不受降解。温度控制在室温至 37 ℃，反应时间一般从数小时到过夜不等。整个过程需避光操作，以防止染料光漂白。

4. 纯化
   偶联反应完成后，通过高效液相色谱（HPLC）或硅胶柱层析对 iFluor 568 Styramide 进行纯化。HPLC 可采用反相色谱（C18）系统，通过梯度洗脱分离未反应的染料、未偶联酪胺和副产物。纯化过程中可结合紫外-可见和荧光检测器，通过 iFluor 568 的特征吸收峰和发射峰精确收集目标产物，保证产物的纯度和光学性能。纯化后的产物通常冻干储存，以提高长期稳定性。

5. 表征
   纯化后的 iFluor 568 Styramide 可通过质谱（MS）确认分子量和偶联是否完成，核磁共振（NMR）验证结构及酰胺键形成。UV-Vis 光谱和荧光光谱用于确认染料吸收和发射波长是否保持稳定，并测定荧光量子产率和光稳定性。

厂家：瑞禧生物

产品目录

花菁染料CY3标记聚乙二醇 CY3-PEG
花菁染料CY3标记壳聚糖 CY3-Chitosan
花菁染料CY3标记利福平 cy3-Rifampicin
花菁染料CY3标记链霉亲和素 CY3-Streptavidin
花菁染料CY3标记磷脂酰乙醇胺 Cy3-PE