BODIPY 530/550 NHS Ester，216961-93-2，反应条件

BODIPY 530/550 NHS Ester羟基琥珀酰亚胺酯，是一种基于 BODIPY 核心结构的活性荧光探针。BODIPY 染料以其高荧光量子产率、良好光稳定性和狭窄吸收发射波段而著称，适用于多重荧光标记和生物分子检测。BODIPY 530/550 的吸收波长约在 530 nm，发射波长约在 550 nm，可产生亮橙色荧光。其 NHS 酯形式为羧基的活性衍生物，可在温和条件下与伯胺或初级氨基发生酰胺化反应，实现荧光偶联。该化学反应是构建荧光标记蛋白、抗体、酶或多功能生物分子的常用方法。

反应条件与机理分析如下：

1. 反应原理
   BODIPY 530/550 NHS Ester 中的活性羧基通过 NHS 酯活化，使其成为高度亲电的酯。酯可与含有初级氨基的生物大分子发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键。此反应为典型的酰胺化反应，不需要催化剂即可在温和条件下进行，并且生成的副产物为水溶性的 N-羟基琥珀酰亚胺，可轻易从体系中除去。该反应特异性高，适用于蛋白质或多肽标记。

2. 反应溶剂与体系
   BODIPY 530/550 NHS Ester 的反应通常在干燥有机溶剂或水-有机混合溶剂中进行。常用溶剂包括二甲基亚砜（DMSO）、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、乙腈或低浓度水溶缓冲液。水分过多会导致 NHS 酯水解，从而降低反应效率，因此通常控制水含量低于 5%。在生物标记实验中，可将 NHS 酯先溶于有机溶剂中，再与蛋白质缓冲液（pH 7–8.5）混合进行反应。

3. pH 与温度条件
   酰胺化反应对 pH 较为敏感，最佳反应条件为缓冲液 pH 7.0–8.5，既保证初级氨基的亲核性，又避免蛋白质变性。温度通常控制在室温至 37 ℃。在过高温度下，蛋白质结构可能被破坏，NHS 酯水解加速；温度过低则反应速度减慢。反应时间通常为 30 分钟至数小时，必要时可延长至过夜以提高标记效率。

4. 氨基基团选择性
   BODIPY 530/550 NHS Ester 主要与自由伯氨基反应，包括蛋白质 N 端和赖氨酸侧链氨基。由于 NHS 酯反应具有一定的选择性，反应条件控制得当可避免非特异性偶联。PEG 链或其他保护基的存在可以进一步调控偶联位置和反应效率。

5. 反应浓度与摩尔比
   为获得高效标记，BODIPY 530/550 NHS Ester 与蛋白或多肽的摩尔比通常为 3–10 倍过量。较高的过量可以补偿 NHS 酯水解损失，提高标记效率，但过量过多可能增加副产物和背景信号。反应浓度一般控制在 0.1–1 mg/mL 的蛋白体系中，以保证分子充分接触且反应均匀。

6. 避光与稳定性
   BODIPY 染料具有良好的光稳定性，但在反应和储存过程中仍需避光操作，以避免光漂白。NHS 酯在干燥条件下低温储存最为稳定，溶解后应尽快使用。反应完成后，可通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱去除未反应的染料和副产物。

厂家：瑞禧生物

产品目录

花菁染料CY3标记顺铂 CY3-CDDP
花菁染料CY3标记丝状蛋白 CY3-Filamin
花菁染料CY3标记四氮杂卓 CY3-tetrazine
花菁染料CY3标记羧酸 CY3-COOH 1361402-15-4
花菁染料CY3标记糖蛋白 CY3-Glycoprotein