CY3-CAQK 的构建一般分为两大部分：肽链固相合成（SPPS）与染料-肽偶联。首先以固相法合成 CAQK 肽段。使用 Fmoc 策略在树脂上自 C 端逐步延伸肽链，各氨基酸通过缩合反应依次连接。为保证后续标记的选择性，需提前确定使用 Lys 的氨基还是 Cys 的硫醇作为连接点。若采用 Lys 作为连接位点，则其侧链氨基应使用适合后期去保护的基团；若采用 Cys-SH，则需为其选择稳定且可在肽链释放后保留的保护基。

肽链构建完成后，使用酸性体系将其从树脂上切割，并同时去除侧链保护基，得到含有目标序列的粗肽。粗肽通常包含短链、未反应氨基酸、缩合副产物，因此需通过反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行初步纯化。用质谱确认产物的分子量，确保其满足后续偶联步骤的要求。

染料连接步骤可根据标记位点分为两种常用模式：(1) Cy3-NHS 酯与肽段氨基的酰胺键形成；(2) Cy3-maleimide 与肽段 Cys-SH 的硫醇加成反应。若选用 NHS 酯偶联，则将肽溶于弱碱性缓冲体系，使氨基处于活泼状态，再加入 Cy3-NHS 衍生物，使其形成稳定的酰胺键。若使用 maleimide 路径，则将肽溶于中性环境，使 Cys 的硫醇保持活性，再与 Cy3-maleimide 反应生成硫醚结构。两种方法均具有较高的位点选择性，但需根据肽本身的序列特点判断适用性。

反应结束后，通过 LC-MS 监测偶联的完成程度，再以制备型 RP-HPLC 纯化最终产物，分离出未反应染料、游离肽及其他杂质。收集目标峰并冻干，即可获得 CY3-CAQK 固体。随后以分析级 HPLC 检查纯度，同时记录其吸收光谱、发射光谱等光学参数，以确认其适用于后续成像或示踪实验。

厂家：瑞禧生物

产品目录

花菁染料CY5标记羟基乙酸共聚物，羟基封端， CY5-PLGA
花菁染料CY5标记巯基 CY5-SH
花菁染料CY5标记巯嘌呤 Cy5-mercaptopurine
花菁染料CY5标记曲克芦丁 Cy5-Troxerutin
花菁染料CY5标记去甲肾上腺素 Cy5-Norepinephrine