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Cy3-dCTP,荧光标记的脱氧胞苷三磷酸的纯化与表征

时间:2025-12-05 09:48:38       浏览:39
Cy3-dCTP,荧光标记的脱氧胞苷三磷酸的纯化与表征

Cy3-dCTP 是一种荧光标记的脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate),其胞苷分子通过共价方式连接 Cy3 花菁染料,使其在 DNA 合成、扩增或荧光标记实验中可作为可视化工具。Cy3-dCTP 同时具备荧光信号和核苷酸活性,可被 DNA 聚合酶在体外反应体系中掺入到新生 DNA 链中,用于荧光探针、标记测序和分子示踪实验。Cy3 的共轭体系保证其在可见光区具有强烈吸收和发射,而脱氧胞苷三磷酸结构则维持了其可被酶识别和整合到核酸链中的特性。

在纯化过程中,Cy3-dCTP 通常采用高效液相色谱(HPLC)进行分离和提纯。HPLC 可利用反相柱或离子交换柱,基于疏水性或带电性质将标记核苷酸与未标记的 dCTP、游离 Cy3 及副产物分离。离子交换 HPLC 对三磷酸的负电荷敏感,可通过梯度盐浓度或缓冲液梯度实现精确分离,而反相 HPLC 则通过有机溶剂梯度控制 Cy3 的疏水性与分离效率。纯化后的产物通常收集峰区溶液,经冻干或透析去除有机溶剂和盐类,获得可长期保存的 Cy3-dCTP 粉末或缓冲溶液。纯化过程需避光操作,以防 Cy3 荧光团光解或分解。

表征方面,Cy3-dCTP 主要通过光谱、质谱和核磁共振(NMR)进行确认。紫外-可见光吸收光谱可显示 Cy3 的特征吸收峰,通常在 550–570 nm 范围,荧光发射峰约在 570–590 nm,这一特性可直接验证荧光标记的完整性和活性。荧光光谱还可用于评估分子浓度和标记效率。质谱(如 MALDI-TOF 或 ESI-MS)用于检测标记核苷酸的分子量,确认 Cy3 已成功共价连接到 dCTP 分子上,同时排除未反应的底物或副产物。核磁共振(¹H-NMR、³¹P-NMR)可进一步验证核苷酸骨架和三磷酸结构的完整性,确保标记过程中未发生磷酸键断裂或核苷环结构破坏。

在实际应用中,纯化和表征的完整性直接影响 Cy3-dCTP 的实验效果。例如在荧光标记 DNA 合成或 PCR 实验中,高纯度和均一的 Cy3-dCTP 可保证掺入效率、荧光强度均匀性及测序或成像结果的可靠性。表征数据还可作为质量控制依据,用于验证批次一致性及储存稳定性。由于 Cy3 易受光照和氧化影响,纯化和储存过程通常在避光条件下进行,并可加入保护剂如 EDTA 以防金属离子催化的降解。

瑞禧生物供应磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、磁性纳米颗粒、纳米金、近红外荧光染料、荧光量子点、碳纳米管、石墨烯及多种功能高分子材料。如有需求可咨询
产品名称:Cy3-dCTP,荧光标记的脱氧胞苷三磷酸
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

厂家:瑞禧生物


产品目录

花菁染料CY7.5标记氨基 CY7.5-NH2
花菁染料Cy7.5标记靶向肽PTP CY7.5-PTP
花菁染料Cy7.5标记标记四嗪 Cy7.5-tetrazine
花菁染料CY7.5标记层粘连蛋白 CY7.5-Laminin
花菁染料CY7.5标记穿膜肽TAT CY7.5-TAT

仅用于科研,不能用于人体。小编axc
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