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CY3-laminin蛋白,CY3-laminin的合成步骤

时间:2025-12-05 10:26:03       浏览:60
CY3-laminin蛋白,CY3-laminin的合成步骤

CY3-laminin 是将花菁染料 Cy3 共价标记在层粘连蛋白(Laminin)分子上的衍生物。Laminin 是细胞外基质中的重要蛋白,具有多功能结构域,可调控细胞黏附、迁移、分化及组织重建。通过 Cy3 偶联,CY3-laminin 获得可见光区荧光信号,同时保留蛋白的天然构象和功能活性,使其在细胞培养、组织工程、分子示踪和成像研究中具有重要应用。Cy3 的花菁共轭骨架在约 550 nm 吸收并在 570–590 nm 发射,为标记分子提供高灵敏度、稳定的荧光信号。

CY3-laminin 的合成步骤主要基于蛋白质上的氨基与 Cy3 活性酯的亲核偶联反应。Laminin 分子中含有大量赖氨酸残基及 N 端氨基,ε-氨基和 α-氨基均可作为偶联位点。最常用的偶联试剂为 Cy3-NHS 酯,能够在缓冲体系中与蛋白质氨基形成稳定的酰胺键。制备过程中,首先将 Laminin 溶解在弱碱性缓冲液中(如 pH 7.5–8.5 的磷酸盐或碳酸盐缓冲液),保证蛋白构象稳定且氨基处于活性状态。

随后,将 Cy3-NHS 酯按设计摩尔比缓慢加入蛋白溶液中。偶联反应通常在温和条件下进行,室温或 4°C 均可,以避免蛋白质变性。柔性连接子在 Cy3 分子与蛋白之间起到缓冲作用,减少荧光团对 Laminin 空间构象的干扰,同时保证偶联后蛋白的功能活性。反应时间一般为数小时至过夜,以确保偶联充分且高效。

偶联完成后,反应体系中可能含有未反应的 Cy3、游离 Laminin 及副产物。为了获得高纯度标记蛋白,需要进行纯化。常用方法包括透析、凝胶过滤和高效液相色谱(HPLC),可根据分子量或极性差异去除杂质。纯化后的 CY3-laminin 可冻干或溶解于缓冲液保存,在低温避光条件下保证荧光稳定性和蛋白活性。

合成产物的表征是确保标记成功和功能保留的重要环节。紫外-可见光谱和荧光光谱可确认 Cy3 偶联及荧光性能;质谱可分析偶联效率和分子量变化;圆二色谱(CD)或其他蛋白构象分析方法可检测 Laminin 二级结构是否保持完整;细胞黏附实验或受体结合实验可验证标记后蛋白的功能保留。

瑞禧生物供应磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、磁性纳米颗粒、纳米金、近红外荧光染料、荧光量子点、碳纳米管、石墨烯及多种功能高分子材料。如有需求可咨询
产品名称:CY3-laminin蛋白
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

厂家:瑞禧生物


产品目录

花菁染料Cy7标记天花粉蛋白 Cy7-trichosanthin
花菁染料CY7标记铜蓝蛋白 Cy7-Ceruloplasmin
花菁染料CY7标记透明质酸 CY7-HA
花菁染料Cy7标记透明质酸 CY7-透明质酸
花菁染料CY7标记胃粘膜素,猪, CY7-MUCIN
花菁染料CY7标记虾青素 CY7-all-trans-Astaxanthin

仅用于科研,不能用于人体。小编axc
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