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CY3-siRISC,CY3标记的siRNA,RISC的合成步骤

时间:2025-12-08 09:55:41       浏览:64
CY3-siRISC,CY3标记的siRNA,RISC的合成步骤

CY3-siRISC(Cy3 标记的 siRNA,用于 RISC)是将橙红色荧光染料 Cy3 引入特定 siRNA 分子后形成的荧光标记产物,该 siRNA 可被 RNA 干扰复合物(RISC, RNA-induced silencing complex)识别并介导基因沉默。该标记分子由两条互补的核糖核苷酸链组成,其中一条链末端通过化学连接臂与 Cy3 荧光团共价结合,使 siRNA 在保持与 RISC 结合能力和干扰活性的同时,具备光学示踪功能。Cy3 荧光团的吸收和发射波长位于可见光橙红区域,信号易于通过荧光显微镜、流式分析仪或多通道成像系统检测,便于观察 siRNA 在体外体系或细胞内的分布、进入路径和动态行为。标记位置通常选择在非功能性末端或不干扰 RISC 结合区域,以保证 siRNA 的双链结构完整性和基因沉默能力。

CY3-siRISC 的组成主要包括双链 siRNA 主体和端部 Cy3 荧光团。siRNA 链由 21–23 个核糖核苷酸单元构成,形成典型的双链 RNA 架构,为 RISC 装载提供结构基础。Cy3 荧光团通过柔性连接臂与 RNA 链末端形成共价键,使标记分子在成像和检测中具有稳定信号输出,同时对 RNA 二级结构影响较小。该结构保证 siRNA 在结合 RISC 时仍保持原有的功能,同时赋予可视化示踪能力。

CY3-siRISC 的合成步骤通常包括三个主要阶段:RNA 链合成、Cy3 标记以及双链形成。首先,通过固相核酸合成技术制备两条互补的 RNA 链,其中一条链的末端带有可用于荧光标记的官能团(如氨基或羟基)。其次,在温和缓冲条件下,将 Cy3 衍生物与 RNA 链末端的修饰基团发生特异性共价反应,通过柔性连接臂固定 Cy3 分子。该步骤需要控制温度和 pH,以确保 RNA 不发生降解或非特异性交联。标记完成后,通常通过高效液相色谱(HPLC)或凝胶纯化方法分离并回收高纯度的 Cy3-siRNA 单链。最后,将两条互补链在适当条件下退火,形成功能性的双链 siRNA,即 Cy3-siRISC,可被 RISC 装载并发挥基因沉默作用。

CY3-siRISC 的特点包括:兼具 RNA 干扰功能和光学示踪能力,能够在细胞内观察 siRNA 的运输、分布以及与 RISC 的装载过程;荧光信号稳定,可在多次成像或时间序列观察中提供一致的读出;端部 Cy3 标记通过柔性连接设计,对 siRNA 构象和功能干扰最小,保证其与 RISC 的结合效率。功能上,Cy3-siRISC 可用于研究 RNA 干扰机制、RISC 装载动态、siRNA 在胞内的定位与降解,以及与其他荧光探针组合进行多通道成像。通过该化学设计,Cy3-siRISC 提供了兼顾基因沉默功能和可视化追踪的有效工具,为 RNA 干扰研究、核酸递送分析及分子机制探索提供了可靠手段。

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产品名称:CY3-siRISC,CY3标记的siRNA
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

厂家:瑞禧生物


产品目录

CY5标记山梨糖 CY5-Sorbose
cy5标记芍药苷 CY5-芍药苷
CY5标记十九氟癸酸 CY5-Perfluorodecanoic Acid
Cy5标记视黄醇结合蛋白 Cy5-视黄醇结合蛋白
Cy5标记丝裂霉素C Cy5-丝裂霉素C

仅用于科研,不能用于人体。小编axc
序号 新闻标题 浏览次数 作者 发布时间
1 DOPC Liposome包载CY5脂质体包载CY菁染料定制 1186 瑞禧生物 2022-10-31
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6 2022瑞禧 生物素化响应性Biotin-PEG-SS-DBCO/Biotin-SS-Sulfo-NHS 1034 瑞禧生物 2022-12-08
7 2022瑞禧 可选分子量 PCL-TK-PEI-DOX/FA 聚已内酯响应性 1127 瑞禧生物 2022-12-08
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