CY3-siNC 指将 Cy3 荧光染料标记在非编码（negative control, NC）siRNA 分子上的标记体系。该分子体系主要由三部分组成：非编码 siRNA 链、连接臂段以及 Cy3 荧光团。非编码 siRNA 是一种不针对任何特定靶基因的短双链 RNA 分子，长度通常为 19–22 个核苷酸，主要用于作为实验对照，以评估 RNA 干扰（RNAi）实验中的非特异性效应。Cy3 属于三甲烯型花菁染料，由两个氮杂芳香环通过多甲烯链形成连续 π 共轭结构，在可见光区域具有稳定的吸收峰（约 550 nm）和发射峰（约 570 nm），可为 siRNA 提供可追踪的荧光信号，使研究者能够在体外或细胞实验中实时观察 siRNA 的分布、摄取及动力学行为。

CY3-siNC 的制备方法主要包括以下步骤：

首先，设计并合成非编码 siRNA 链。由于其不特异性配对靶基因，序列通常选取不在实验体系中表达的任意 RNA 区域，但保留双链结构和长度特性，以确保在 RNAi 递送体系中与目标 siRNA 具有类似的物理化学行为。siRNA 链可以通过固相合成获得，并在合成完成后经纯化和冻干处理，确保链段完整且便于后续反应。

第二步是标记位点的选择与活化。Cy3 的标记通常在 siRNA 链端进行（5′ 或 3′），以避免干扰双链结构和潜在的 RNAi 活性。Cy3 常以 NHS 酯或磷酰胺化衍生物形式存在，可与 RNA 链上氨基或修饰碱基反应。溶液标记前，将 siRNA 溶解在弱碱性缓冲液中（如 pH 7.5–8.5），以增强氨基的亲核性，同时避免 RNA 水解或链降解。

第三步为主要反应过程。若使用 Cy3-NHS 酯，氨基对酰基碳进行亲核攻击，形成四面体中间体，随后活化离去基团释放，生成稳定的酰胺键。若使用点击化学方法，RNA 链可预修饰叠氮或炔基，Cy3-炔基或叠氮基通过铜催化 [3+2] 环加成反应生成稳定的三唑环结构，实现共价固定。整个过程温和、快速，不会破坏 RNA 链的结构，也不会引入显著副反应。

第四步是反应终止与纯化。反应完成后通常加入小分子氨基或缓冲液消耗剩余活化染料，避免游离 Cy3 干扰实验。随后通过反相高效液相色谱（HPLC）或凝胶过滤对标记产物进行分离，确保最终体系中荧光信号来源于已标记 siRNA。纯化后的 CY3-siNC 可冻干或缓冲置换保存，以保证长期稳定性。

制备完成的 CY3-siNC 在水相中呈均匀分散状态，带负电荷的磷酸骨架保证良好水溶性和分散性。Cy3 提供可追踪荧光信号，使该体系在细胞实验或体外递送研究中能够作为对照，评估递送载体、摄取效率及非特异性效应。整体而言，CY3-siNC 是一种集标记、稳定性和可追踪性于一体的对照 siRNA 工具，为 RNAi 实验设计与递送研究提供可靠基础。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7.5标记精氨酸 CY7.5-Arginine
CY7.5标记精蛋白 CY7.5-Protamine
CY7.5标记肼 Cy7.5-hydrazide
CY7.5标记菊粉 Cy7.5-Inulin