CY3-TFO 指在三链形成寡核苷酸（Triplex-Forming Oligonucleotide, TFO）上引入 Cy3 荧光染料形成的标记体系，用于化学研究和分子探针分析。TFO 是一类能够识别特定 DNA 双链序列并通过 Hoogsteen 或反 Hoogsteen 氢键形成三链结构的短链核酸，通常长度为 15–25 个核苷酸，具有序列特异性和可控结合能力。Cy3 为三甲烯型花菁染料，由两个氮杂芳香环通过多甲烯链形成连续 π 共轭结构，吸收峰约 550 nm，发射峰约 570 nm，可为 TFO 提供稳定荧光信号，实现可视化检测和动力学研究。

CY3-TFO 的化学标记原理主要依赖于 Cy3 活化基团与 TFO 核酸链上的官能团发生共价反应。最常用的标记方式包括活化酯反应和点击化学反应。以 Cy3-NHS 酯为例，其反应原理为亲核加成反应：TFO 链端或修饰碱基上的氨基作为亲核试剂攻击 NHS 酯上的碳酰中心，形成四面体中间体，随后 NHS 离去生成稳定的酰胺键，从而将 Cy3 固定在 TFO 分子上。该反应温和、选择性高，能够在水相体系中进行，不破坏 TFO 双链结构及三链形成能力。

另一种常用标记方法是点击化学反应，其机理为铜催化的叠氮-炔基 [3+2] 环加成。若 TFO 在链端或碱基上预修饰叠氮基或炔基，Cy3-叠氮或 Cy3-炔基在铜催化条件下发生环化，生成三唑环稳定连接。该反应具有高选择性、温和条件和快速反应速度，形成的三唑环在水相和生理条件下表现出良好的化学稳定性。通过这种方式，Cy3 可高效标记 TFO 而不影响其三链结合特性。

标记位点选择对于保持 TFO 功能至关重要。通常选择链端或非 Hoogsteen 配对区域作为连接部位，避免干扰碱基间氢键形成，从而保证 TFO 的三链结合能力。标记后的 Cy3 通过柔性连接臂固定在链端，使荧光团能够在水相中自由旋转，同时保持分子稳定性和可溶性。

在化学研究中，CY3-TFO 可用于三链形成动力学、序列特异性结合分析以及与蛋白或小分子的相互作用研究。通过荧光共振能量转移（FRET）、荧光强度监测或光谱分析，研究者可以定量分析 TFO 与靶 DNA 的结合速率、稳定性和构象变化。此外，标记的荧光信号可用于研究离子强度、pH 或化学修饰对三链稳定性的影响，为核酸化学和分子识别机制提供数据支撑。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7.5标记透明质酸 CY7.5-Hylauronic-acid
CY7.5标记脱硫生物素 CY7.5-Desthiobiotin
CY7.5标记万古霉素 CY7.5-Vancomycin
CY7.5标记细胞色素C CY7.5-Cytochrome-C
CY7.5标记纤维蛋白原 CY7.5-Fibrinogen