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CY3-Protamine-sulfate,CY3标记硫酸鱼精蛋白的合成过程研究

时间:2025-12-10 10:38:06       浏览:52
CY3-Protamine-sulfate,CY3标记硫酸鱼精蛋白的合成过程研究

Cy3-标记硫酸鱼精蛋白(Cy3-Protamine Sulfate) 是通过将 Cy3 荧光染料共价连接到硫酸鱼精蛋白(Protamine Sulfate)分子上形成的荧光标记复合物,使其在细胞摄取研究、核酸递送和分子追踪实验中具有可视化能力。硫酸鱼精蛋白是一类低分子量、高阳离子聚合蛋白,富含精氨酸残基,具有高度正电荷和强亲核性,易与阴离子核酸分子结合形成复合物。Cy3-Protamine Sulfate 结合了蛋白的聚阳性特性与 Cy3 的光学信号优势,可用于研究带电分子复合体的形成、细胞膜内化及核酸载体追踪等实验。

Cy3(Cyanine 3) 属于卡宾菁类染料,其分子骨架由两端的吲哚啉或苯并吲哚环与中间三亚甲基多烯链构成,形成延展的 π 共轭体系,能够吸收约 540–550 nm 光并发射 560–570 nm 红橙色荧光。染料分子常带亲水性取代基,如磺酸基,以增强在水溶体系中的分散性,减少聚集导致的荧光淬灭。为了实现硫酸鱼精蛋白标记,Cy3 通常使用活性衍生物形式,如 NHS 酯、maleimide 或叠氮基,可选择性与蛋白表面的胺基或改造官能团发生共价反应。

合成过程研究可概述为以下步骤:第一步为蛋白溶液准备,将硫酸鱼精蛋白溶解于适宜缓冲液(通常 pH 7–9),保持精氨酸侧链氨基可用作亲核位点。该步骤需要控制蛋白浓度和溶液离子强度,以避免聚集或沉淀。第二步为 Cy3 活性衍生物溶解和反应。Cy3-NHS 酯通常溶解于干燥极性有机溶剂(如 DMSO 或 DMF),然后缓慢加入蛋白溶液中,使蛋白表面的氨基发生亲核攻击,生成稳定的酰胺键。反应温和进行,避光处理,保证荧光染料结构和蛋白构象的完整性。

反应完成后,纯化环节主要通过透析、凝胶过滤或离心过滤去除未反应染料和小分子杂质。透析可通过半透膜移除自由 Cy3 分子,凝胶过滤可进一步去除聚集体或不完全反应产物,从而获得高纯度的 Cy3-Protamine Sulfate。纯化后的标记蛋白可通过紫外-可见光谱和荧光光谱进行表征,确定染料-蛋白摩尔比及荧光特性,并通过SDS-PAGE或毛细管电泳分析蛋白完整性及聚集状态。

工艺研究中,标记效率、荧光强度及蛋白功能保持之间需平衡。过高的 Cy3 与蛋白摩尔比可能导致蛋白结构改变或复合物形成能力下降,而过低的标记比例可能造成荧光信号不足。通过优化 pH、缓冲体系、温度、反应时间及染料与蛋白比例,可获得高标记效率、稳定荧光和功能完整的 Cy3-Protamine Sulfate。标记后蛋白在水溶体系中分散性良好,保留其多阳性特性,可与阴性核酸分子形成复合物,用于细胞递送或膜内化研究。

瑞禧生物供应磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、磁性纳米颗粒、纳米金、近红外荧光染料、荧光量子点、碳纳米管、石墨烯及多种功能高分子材料。如有需求可咨询
产品名称:CY3-Protamine-sulfate
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

厂家:瑞禧生物


产品目录

.CY7标记小麦谷蛋白 CY7-Wheat-Gliadin
CY7标记小麦胚芽凝集素 CY7-Wheat germ agglutinin
CY7标记血红蛋白 CY7-Hemoglobin
CY7标记血蓝蛋白 CY7-Keyhole Limpet Hemocyanin,KLH,

仅用于科研,不能用于人体。小编axc
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