Cy3-标记尿路上皮蛋白（Cy3-Uroplakin） 是将荧光染料 Cy3 共价连接到尿路上皮蛋白（Uroplakin, UP）分子上形成的荧光复合物，用于尿路上皮细胞膜研究、蛋白分布追踪以及生物成像。尿路上皮蛋白是一类跨膜糖蛋白，主要存在于膀胱和尿道上皮细胞表面，参与形成致密的膜结构，分子量一般在 27–45 kDa。UP 分子表面含有可修饰的赖氨酸、半胱氨酸和糖链，为 Cy3 的共价标记提供反应位点。Cy3-Uroplakin 将蛋白的膜定位功能与 Cy3 的荧光特性结合，可用于细胞膜动态研究、受体结合分析及分子运输研究。

反应步骤主要包括蛋白准备、Cy3 活性衍生物溶解、标记反应、反应终止及产物纯化。首先，将尿路上皮蛋白溶解在适宜缓冲液（通常为 pH 7–9 的中性至弱碱性缓冲体系）中，保持蛋白折叠稳定并确保赖氨酸和半胱氨酸侧链可用作亲核反应位点。缓冲液中可添加少量螯合剂以避免金属离子对蛋白结构影响，同时确保蛋白表面暴露的功能位点不受干扰。

其次，将 Cy3 活性衍生物（如 Cy3-NHS 酯、Cy3-maleimide 或叠氮基 Cy3）在干燥有机溶剂中溶解，缓慢加入蛋白溶液中。在 Cy3-NHS 酯反应中，蛋白表面的赖氨酸氨基对活性酯碳原子进行亲核攻击，形成稳定的酰胺键；在 Cy3-maleimide 反应中，蛋白巯基对 maleimide α,β-不饱和碳双键进行 Michael 加成，生成稳定硫醚键；通过点击化学反应，叠氮基与蛋白炔基生成三唑环结构，实现选择性标记。反应通常在温和条件下进行（低温避光，反应 1–4 小时），以保证蛋白折叠和荧光稳定性，同时避免非特异性修饰。

反应终止通常通过加入氨水或甘氨酸缓冲液以消耗未反应的 Cy3 活性酯，避免过量染料残留干扰后续实验。随后，标记产物需进行纯化，去除未反应的自由染料和小分子副产物。常用方法包括透析、凝胶过滤（Size-Exclusion Chromatography, SEC）和离心过滤。透析利用半透膜去除小分子游离染料，凝胶过滤可根据分子大小分离 Cy3-Uroplakin 与自由 Cy3，使产物达到高纯度且分散均匀。

纯化后的 Cy3-Uroplakin 可通过表征确认标记成功，包括荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、SDS-PAGE 和质谱分析。荧光光谱可确认 Cy3 的吸收峰和发射峰，评估标记效率；紫外光谱可测定蛋白浓度并计算染料-蛋白摩尔比；SDS-PAGE 可分析蛋白完整性和聚集状态；质谱可精确确认标记位点和标记数量。通过这些步骤可确保 Cy3-Uroplakin 既具有稳定荧光信号，又保持蛋白折叠和膜结合功能。

厂家：瑞禧生物

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CY7-聚乙二醇-氨基，Cyanine7-PEG-NH2，
CY7-聚乙二醇-白藜芦醇，Cyanine7-PEG-Resveratrol，
CY7-聚乙二醇-蛋白A，Cyanine7-PEG-Protein A，
CY7-聚乙二醇-刀豆球蛋白A，Cyanine7-PEG-ConA，
CY7-聚乙二醇-叠氮，Cyanine7-PEG-N3，