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中文名称:Cy5 荧光标记抗体/蛋白试剂盒(10~100 mg 标记量)
英文名称:Cy5 Fluorescent Labeling Kit for Antibodies/Proteins (10–100 mg labeling scale)
Cy5 荧光标记抗体/蛋白试剂盒是一种将近红外荧光染料 Cy5 与抗体或蛋白分子进行共价偶联的工具,适用于体外荧光检测、免疫成像以及蛋白示踪实验。该试剂盒通过预先优化的反应条件,使用户能够在 10~100 mg 的蛋白量范围内实现高效、可控的荧光标记。
合成步骤主要包括以下几个环节:
蛋白预处理
首先,将待标记的抗体或蛋白溶解在适宜的缓冲液中,常用为 pH 8.0 左右的碳酸盐或磷酸盐缓冲液。该步骤旨在保证蛋白质处于稳定的构象,并使其表面氨基(通常为赖氨酸侧链或 N 端氨基)活性化,以便进行偶联反应。必要时可对蛋白进行去盐或缓冲液交换,以去除可能干扰偶联的杂质或低分子盐类。Cy5 活性衍生物的准备
试剂盒提供的 Cy5 通常为 N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS 酯)或其他适合氨基偶联的活性形式。Cy5-NHS 酯可溶解于无水有机溶剂(如 DMSO)中,保证其活性并便于添加到蛋白溶液中。偶联反应
将 Cy5 溶液缓慢加入蛋白缓冲体系中,在温和条件下(室温或 4°C)搅拌反应数小时。NHS 酯活性基团与蛋白表面的氨基发生亲核加成,形成稳定的酰胺键,从而将荧光染料固定到蛋白分子上。反应条件的优化能够控制标记比例,避免过度标记影响蛋白功能。反应终止与去除游离染料
偶联完成后,通过透析、凝胶过滤或超滤技术去除未反应的 Cy5 小分子及副产物。此步骤保证了最终产物的纯度,同时减少自由染料对后续实验的干扰。产物收集与质量确认
纯化后的 Cy5 标记蛋白可通过紫外-可见吸收光谱和荧光光谱确认染料引入情况。典型方法是测定 Cy5 的特征吸收峰和蛋白质浓度,计算标记度(Dye-to-Protein Ratio, DPR)。必要时,还可进行 SDS-PAGE 或功能性实验验证蛋白活性保持情况。

纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
厂家:瑞禧生物
产品目录
DSPE-PEG2000-FITC
DSPE-PEG2K-iRGD
CY5 NH2
DMG-PEG2K-Mannose
DSPE-PEG2K-SH
DSPE-PEOz2K
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