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α-Bungarotoxin-AF700的荧光检测

时间:2026-01-05 16:18:57       浏览:55
产品名称:α-Bungarotoxin-AF700的荧光检测
一、荧光检测原理与特性
检测机制:AF700的近红外发射信号通过共聚焦显微镜、流式细胞术或活体成像系统捕获,实现nAChRs的特异性标记与动态追踪。
优势特性:
高特异性:α-Bungarotoxin仅结合nAChRs的α1/α7亚基,确保标记准确性。
低背景干扰:近红外光避开生物组织自发荧光,提升信噪比。
多色兼容性:可与绿色(如AF488)、蓝色(如CF405M)或红色(如AF647)染料联用,实现多目标共定位。
光稳定性:长时间激发下信号衰减缓慢,适合活细胞/活体动态监测。
二、检测步骤与操作要点
1. 样本准备
细胞/组织处理:固定样本用4%甲醛短时处理(5分钟),活细胞直接孵育;封闭非特异性位点(如1% BSA-PBS缓冲液)。
探针稀释:用PBS/HBSS缓冲液配制工作液(1–5 μg/mL),避光操作,现配现用。
2. 孵育与洗涤
孵育条件:活细胞室温/37℃避光孵育15–30分钟;固定样本延长至30–60分钟。
洗涤步骤:PBS清洗3次,彻底去除未结合探针。
3. 检测方法
显微镜成像:配置远红滤光片组(激发690 nm,发射720 nm),适用于共聚焦/超分辨成像,研究受体分布、内吞/外排动态。
流式细胞术:640–645 nm激光激发,检测APC-Cy7或类似通道(660–720 nm),定量分析受体表达水平。
活体成像:利用近红外穿透力,追踪活体动物模型中的受体分布与药物递送路径。
4. 对照与验证
阴性对照:未染色样本或无关荧光抗体设定基线。
特异性验证:通过受体阻断剂(如BSpep肽)或竞争性抑制实验(预孵育未标记α-Bungarotoxin)确认信号特异性。


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