产品名称：AF 647 COOH，2090339-69-6的反应条件
一、核心反应类型与活化机制
羧基活化：AF647 COOH的末端羧基需通过EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺）/NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）组合活化，转化为高反应活性NHS酯，再与生物分子（蛋白质、抗体、多肽、核酸）的伯胺基团（-NH₂）发生酰胺化反应，形成稳定不可逆的酰胺键。
反应特异性：活化后仅与伯胺基团反应，对巯基（-SH）、羟基等其他基团无交叉反应，标记特异性高。
二、详细反应条件
活化阶段：
试剂比例：EDC与NHS的摩尔比为染料羧基的2:1~3:1，确保羧基充分活化。
pH控制：最佳pH 4.5-6.0，此酸性环境促进羧基活化，避免水解或自聚。
反应条件：室温避光反应15-30分钟，全程需严格避光，防止荧光淬灭。
偶联阶段：
pH控制：最佳pH 7.0-8.5（如PBS或HEPES缓冲液），此中性环境利于酰胺键形成。
反应条件：室温避光反应30-60分钟，染料与目标分子摩尔比为8:1~25:1（根据目标分子伯胺数量调整）。
缓冲液选择：避免含游离胺类物质（如Tris、甘氨酸），防止竞争结合活化位点。
合成与纯化：
合成路径：AF647羧酸经EDC/NHS活化转化为NHS酯，反应在室温下进行8-12小时，严格控制染料羧酸:EDC:NHS=1:1.2:1.2的比例，避免多聚杂质。
纯化方法：通过反相HPLC（C18柱，流动相乙腈/水含0.1%三氟乙酸）纯化，纯度可达98%以上。
三、储存与操作规范
长期储存：-20℃以下避光、干燥、密封保存，加入硅胶干燥剂，避免反复冻融。固体状态有效期24个月，配液后小体积分装避光冻存，有效期1-2周。
操作注意事项：
全程避光操作，防止荧光淬灭；从冰箱取出后需室温回温30分钟再开盖。
避免与强还原剂（如DTT）接触，以防羧基还原；避免与含胺物质或高盐溶液接触。
NHS酯在水相中半衰期约2小时，需现配现用。


关于我们：
西安瑞禧生物科技有限公司经营的产品种类包括有：近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二影产品，荧光蛋白及荧光探针等，欢迎咨询。


相关产品‌
Methoxy-PEG-SPA，甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯，SPA-PEG-Methoxy
Methoxy-PEG-PTMC，甲氧基聚乙二醇-三亚甲基碳酸酯‌，mPEG-PTMC
Methoxy-PEG-COOtBu，甲氧基聚乙二醇-疏水性叔丁氧羰基，mPEG-COOtBu
AF 555-二苯并环辛炔，AF 555-DBCO，Alexa Fluor 555-二苯并环辛炔
streptavidin-PEG-SH；巯基聚乙二醇链酶亲和素；streptavidin-PEG3400-SH‌
双醛基PEG400，OHC-PEG-CHO，双醛基聚乙二醇