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AF647 BSA,Alexa Fluor 647 标记牛血清白蛋白,化学反应原理

时间:2026-02-11 14:53:11       浏览:63
AF647 BSA,Alexa Fluor 647 标记牛血清白蛋白,化学反应原理

英文名称:Alexa Fluor 647-Bovine Serum Albumin Conjugate
中文名称:Alexa Fluor 647 标记牛血清白蛋白

AF647-BSA 是一种由荧光染料 Alexa Fluor 647 与牛血清白蛋白(BSA, Bovine Serum Albumin)通过共价偶联形成的功能性生物分子。该分子将荧光标记功能与高分子蛋白载体结合,可用于免疫分析、蛋白质示踪、药物载体功能研究以及生物材料标记实验。AF647-BSA 的制备核心在于利用染料的活性官能团(如NHS酯)与蛋白分子的游离氨基进行化学反应,从而形成稳定的共价键,实现可控荧光标记。

化学反应原理分析

  1. 活性官能团选择性
    Alexa Fluor 647 通常以 N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS ester)形式存在,其末端羧基经过活化形成高反应性的酯键(–CO–ONSu)。BSA 蛋白质中富含赖氨酸残基的 ε-氨基(–NH2)以及N端氨基,是可被 NHS 活性酯选择性修饰的位点。该选择性反应保证了偶联效率,同时不破坏蛋白质主链结构。

  2. 反应机理
    AF647-NHS 的反应属于亲核加成-消除型反应(Nucleophilic Acyl Substitution):

    • 亲核攻击:蛋白质氨基的孤对电子攻击NHS酯羰基碳,形成四面体中间体。

    • 消除步骤:NHS 分子脱离,形成稳定的酰胺键(–CO–NH–),将荧光染料牢固连接到蛋白质上。
      该过程反应温和,通常在中性至弱碱性缓冲液(pH 7.0–8.5)中进行,以保持蛋白质构象和荧光团稳定性。

  3. 溶剂与环境条件
    偶联反应多在水相或缓冲液体系中进行,可加入少量DMSO溶解荧光染料,确保反应均匀。温度通常为室温或轻微升温,避免高温导致蛋白质变性。反应时间可调控,以实现部分或高密度标记,根据实验需求控制染料与蛋白的摩尔比。

  4. 标记效率与稳定性
    AF647-BSA 偶联形成的酰胺键稳定,不易水解或解离,在生物实验条件下保持荧光信号持久。标记效率受染料摩尔比、缓冲液pH、蛋白质浓度和反应时间影响。通过优化这些参数,可获得单体标记或多重标记的蛋白质样品。

  5. 应用优势
    AF647-BSA 兼具蛋白质的生物相容性和 Alexa Fluor 647 的远红荧光特性:

    • 可用于免疫荧光分析、细胞或组织标记;

    • 作为分子示踪工具研究蛋白质动力学或纳米载体分布;

    • 可与其他荧光体系多重标记,进行多色成像实验。

瑞禧生物供应磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、磁性纳米颗粒、纳米金、近红外荧光染料、荧光量子点、碳纳米管、石墨烯及多种功能高分子材料。如有需求可咨询

纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
厂家:瑞禧生物

产品目录

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