Azide-PEG-Biotin，中文名称为叠氮-聚乙二醇-生物素，常用英文别名为N3-PEG-Biotin、Azido-PEG-Biotin，是一种兼具点击反应活性与高亲和结合能力的功能化聚乙二醇衍生物，由叠氮基团（-N₃）、聚乙二醇（PEG）柔性链和生物素（Biotin）三部分共价连接而成，主要应用于生物分子偶联、纳米材料修饰、化学生物学研究等领域，不涉及临床治疗相关用途。该化合物具有良好的水溶性和生物相容性，PEG链的引入可有效降低生物分子的免疫原性，减少非特异性吸附，同时提升化合物的分散性，是生物探针制备、药物载体修饰的重要原料。

其制备采用分步偶联策略，核心在于实现叠氮基团、PEG链与生物素的高效连接，且保证各官能团的活性不受破坏。第一步为PEG链的活化，选择单羧基单羟基PEG作为起始原料，根据实验需求选择1k、2k、5k、10k等不同分子量的PEG，将PEG溶于无水二甲基亚砜（DMSO）中，加入过量的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）和二环己基碳二亚胺（DCC），室温避光搅拌反应2-3小时，使PEG末端的羧基活化形成NHS酯，反应完成后过滤去除生成的二环己基脲（DCU）沉淀，通过透析法去除未反应的NHS和DCC，真空干燥得到活化的PEG-NHS中间体。

第二步为叠氮基团的偶联，将活化的PEG-NHS中间体溶于PBS缓冲液（pH 7.4）中，加入过量的叠氮乙胺，37℃恒温搅拌反应6-8小时，使PEG-NHS的活化酯与叠氮乙胺的氨基发生酰胺化反应，在PEG一端引入叠氮基团，反应结束后通过超滤去除小分子副产物，得到Azide-PEG-OH中间体。第三步为生物素的偶联，将Azide-PEG-OH中间体溶于无水DMSO中，再次加入NHS和DCC活化末端羟基，随后加入生物素，室温避光搅拌反应4-6小时，实现生物素与PEG另一端的共价连接。反应完成后，经HPLC纯化收集目标组分，真空干燥后获得高纯度的Azide-PEG-Biotin。该化合物储存于-20℃干燥避光环境，叠氮基团可与炔基、DBCO基团发生高选择性点击反应，生物素可与链霉亲和素特异性结合，广泛用于蛋白质标记、核酸固定及生物传感器制备。

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