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PerCP-Cy5,PerCP-Cyanine5 Conjugate,多甲藻叶绿素蛋白-花青素5

时间:2026-06-01 16:32:48       浏览:16

PerCP-Cy5(PerCP-Cy5,多甲藻叶绿素蛋白-花青素5)是另一种基于PerCP供体与Cy5受体偶联的tandem荧光染料,与PerCP-Cy5.5同属一个tandem染料家族,但受体染料从Cy5.5替换为Cy5,导致发射光谱发生约15 nm的蓝移。英文全称为Peridinin-Chlorophyll Protein-Cyanine 5,中文名称为多甲藻叶绿素蛋白-花青素5。补充英文名包括:PerCP-Cy5 Tandem、PerCP-Cyanine5 Conjugate、Peridinin-Chlorophyll-Cy5。

PerCP-Cy5的供体部分与PerCP-Cy5.5完全相同,均为多甲藻黄素叶绿素蛋白(PerCP),吸收峰位于480 nm,*大发射约675 nm。区别在于受体染料:PerCP-Cy5使用Cy5(发射峰670 nm),而PerCP-Cy5.5使用Cy5.5(发射峰694 nm)。这一差异看似微小,但在多色流式分析的通道分配中具有决定性意义。

从能量转移效率来看,PerCP到Cy5的FRET效率略低于PerCP到Cy5.5。原因在于Cy5的吸收光谱与PerCP的发射光谱重叠程度稍逊于Cy5.5,导致Förster距离(R₀)略小。实际应用中,PerCP-Cy5的荧光强度通常比PerCP-Cy5.5低10-20%,但其发射峰更靠近APC(660 nm)通道,在某些特定的配色方案中具有不可替代的位置。

在多色面板设计中,PerCP-Cy5与PerCP-Cy5.5的组合使用可实现更精细的光谱分离。例如,在一个8色面板中,可将PerCP-Cy5分配至670/20 nm滤光片通道,PerCP-Cy5.5分配至695/40 nm通道,两者之间的光谱交叉可控制在5%以下。这种设计使同一激光线(488 nm)可驱动两个独立的检测通道,有效倍增可用参数数量。

与单独使用Cy5相比,PerCP-Cy5的优势在于激发波长的灵活性。游离Cy5需要633 nm红光激光激发,而PerCP-Cy5仅需488 nm蓝光激光即可高效激发。在仅配备488 nm和633 nm双激光的流式细胞仪上,PerCP-Cy5可将488 nm通道的利用率*大化,而无需占用633 nm通道。这对于激光配置有限的仪器尤为重要。

PerCP-Cy5在海洋微生物生态学研究中有独特应用。由于PerCP本身来源于海洋多甲藻,其光谱特性与海洋样品中的叶绿素荧光有一定关联,在藻类群落分析中,PerCP-Cy5偶联的抗体可用于区分不同藻类种群,同时利用PerCP供体的特性减少叶绿素自发荧光的干扰。

在材料标记领域,PerCP-Cy5可用于多色编码纳米粒子。将不同比例的PerCP-Cy5与其他荧光染料偶联至同一批次纳米粒子上,可制备具有不同荧光"指纹"的编码粒子,用于高通量筛选和多重检测。

合成上,PerCP-Cy5的制备采用与PerCP-Cy5.5类似的化学偶联策略。PerCP蛋白上的赖氨酸残基与Cy5-NHS酯在弱碱性缓冲液(pH 8.5)中反应,控制染料/蛋白比(D/P比)在3-5:1以保证足够的能量转移效率。偶联产物经凝胶过滤层析纯化,去除游离染料。


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