FITC-YVADAPK (Dnp)，中文全称异硫氰酸荧光素 - 二硝基苯修饰 YVADAPK 多肽，CAS 编号 1926163-32-7，是一套具备荧光淬灭 - 恢复双响应特性的多肽荧光示踪试剂，核心由荧光发光基团 FITC、淬灭基团 Dnp（2,4 - 二硝基苯基）与 YVADAPK 功能多肽链三部分共价偶联构成，区别于单一荧光标记多肽，该分子构建起分子内荧光共振能量转移（FRET）闭环体系，适配生化底物分子互作定性定量分析场景。 合成路径以固相多肽合成技术为基础，先依托 Fmoc 固相合成树脂依次缬氨酸、丙氨酸、天冬氨酸等氨基酸单元，线性组装完整 YVADAPK 七肽骨架，多肽 C 端保留游离氨基位点用于共价连接 Dnp 淬灭基团，N 端活性氨基与异硫氰酸荧光素的异硫氰酸根发生亲核加成反应，形成稳定硫脲键实现 FITC 荧光基团固定。

合成后采用反相高效液相色谱完成粗产物分离纯化，配合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱验证分子量匹配度，保证产物纯度高于 95%，规避游离荧光染料、未偶联多肽杂质对检测信号的干扰。 分子光学特性呈现典型关闭型 FRET 响应，完整未被酶切的 FITC-YVADAPK (Dnp) 分子内，FITC 激发产生的 525nm 发射荧光会通过能量转移被相邻 Dnp 基团完全淬灭，体系无明显荧光信号；当多肽骨架特异性位点发生酶切断裂后，FITC 荧光基团与 Dnp 淬灭基团空间距离大幅拉开，FRET 效应失效，525nm 特征荧光恢复，荧光强度与底物酶切反应程度呈线性相关。 

该荧光多肽试剂适配体外生化酶活动态监测体系，无需额外分离游离荧光基团，可直接通过微孔板荧光分光光度计实现实时连续读数。相较于普通单一 FITC 标记多肽，淬灭型双修饰结构大幅降低背景荧光干扰，检测信噪比提升三倍以上，可用于多肽水解酶底物识别特异性筛选、多肽剪切动力学参数测算、小分子化合物酶活调控活性初筛等基础生化研究。试剂理化性质稳定，中性缓冲水溶液中避光条件下可储存 7 天，冻干粉末常温避光密封储存有效期可达 18 个月，分子无细胞渗透毒性干扰，仅作为体外生化示踪底物使用，不涉及生物体内诊疗相关应用。整套分子的 FRET 淬灭效率、多肽酶切结合常数、荧光线性检测区间均可通过光谱扫描完整标定，为多肽酶学基础机理探究提供高灵敏可视化检测工具。

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