Rhod-2 Acetoxymethyl ester，中文正式名称为罗丹明-2 乙酰氧基甲酯，它的常用别名还包括Rhod-2 AM、Rhodamine-2 Acetoxymethyl Ester、Tetramethylrhodamine-2 AM Ester，是基于罗丹明母核设计开发的长波长钙离子荧光探针。该探针的核心设计特点是在钙离子螯合位点的侧链上引入了乙酰氧基甲酯修饰基团，这种修饰让原本高度亲水的探针转变为脂溶性分子，可以轻松穿透活细胞的细胞膜进入胞内。 当Rhod-2 AM进入活细胞后，胞内广泛存在的非特异性酯酶会快速水解分子上的所有乙酰氧基甲酯基团，释放出带有多个负电荷的游离Rhod-2分子，这些带电荷的探针分子无法再次穿透细胞膜逃逸到胞外，从而被长时间截留在细胞内部。

与传统的Fluo-3、Fluo-4等绿色荧光钙探针相比，Rhod-2的激发和发射波长都处于红光区域，*大激发波长约552nm，*大发射波长约581nm，这一波长范围可以有效减少细胞内线粒体等细胞器的自发荧光干扰，同时降低短波长激发光对活细胞产生的光毒性，非常适合长时间的活细胞动态示踪实验。除此之外，Rhod-2的分子结构带有一定的正电荷特性，在负载过程中会优先富集到线粒体区域，因此它也被广泛应用于线粒体钙离子动态变化的特异性检测。 

在实际的探针负载操作中，通常需要将Rhod-2 AM溶解在无水DMSO中配制成高浓度的储存液，临用前用细胞培养液稀释至工作浓度，在37℃的细胞培养箱中与细胞共同孵育20-40分钟，之后更换新鲜培养液继续孵育10分钟，确保胞内的酯酶充分完成水解反应。在示踪实验中，它可以实时记录细胞受到外界刺激后胞内钙离子浓度的动态波动过程，捕捉到毫秒级别的钙瞬变信号。在原代细胞培养体系中，它还可以同时对大量细胞进行钙信号同步成像，分析细胞群体之间钙信号传递的网络特性，为细胞信号转导的相关研究提供精准的定量数据。

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