Cy3B-TCO，中文正式名称为花菁3B-反式环辛烯，英文别名包括Cyanine3B trans-cyclooctene、Cy3B tetrazine ligation probe、TCO-functionalized Cy3B，是将高稳定性的Cy3B荧光基团与反式环辛烯生物正交基团共价结合的新型荧光标记试剂。该化合物利用反式环辛烯与四嗪基团之间的快速生物正交点击化学反应，可在极低浓度下实现目标分子的高效荧光标记，反应速率常数可达10³ M⁻¹s⁻¹级别，远高于传统的酰胺化标记反应。

在合成生物学研究中，Cy3B-TCO可与基因编码的非天然氨基酸技术联用，将带有四嗪基团的非天然氨基酸定点插入到目标蛋白的特定位点，随后加入Cy3B-TCO探针，在温和的生理条件下即可快速完成蛋白的定点荧光标记。这种标记方式几乎不会对蛋白的天然构象和活性产生干扰，可用于观测膜蛋白在活细胞表面的动态扩散过程，通过单颗粒追踪技术解析蛋白分子的运动轨迹，揭示膜蛋白与细胞骨架之间的相互作用机制。在材料表面功能化方向，该探针可用于修饰带有四嗪基团的二维材料表面，通过可控的生物正交反应，将Cy3B荧光分子以预设的密度精准锚定在石墨烯、二硫化钼等二维材料的表面，制备出荧光图案化的二维功能材料，用于研究二维材料表面的分子能量转移效应，为新型光电器件的性能优化提供实验模型。

Cy3B母核的刚性化分子结构使其几乎不存在非特异性的疏水吸附，在复杂的生物体系中背景荧光极低，同时其抗光漂白性能相比传统Cy3染料提升了一倍，可支持长达数小时的活细胞长时间动态成像。反式环辛烯基团的引入，让该探针的标记反应无需任何催化剂参与，完全避免了重金属催化剂对生物样本或功能材料的毒性干扰，大幅拓展了生物正交荧光标记技术的应用场景。目前该试剂已成为活细胞蛋白动态观测、二维材料功能化研究领域的热门工具。

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